CAJ | 학술논문

目的: 构建重组表达载体P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗并接种小鼠, 评价其诱导的体液和细胞免疫应答.方法: 利用分子克隆技术, 构建重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31, 同时构建P-BAP31/EGFP和P-L-BAP31/EGFP重组质粒, 并将其以脂质体瞬时转染HeLa细胞, 通过荧光显微镜观察目的蛋白的表达;将重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31免疫C57BL/6小鼠, 采用间接ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价;通过酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测免疫脾细胞在受到BAP31抗原刺激后产生IFN-γ和IL-4细胞因子的频率;通过乳酸脱氢酶(LDH释放)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答.结果: 酶切及测序结果表明, 成功构建了针对BAP31肿瘤抗原的P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗.通过荧光显微镜观察重组质粒转染的HeLa细胞, 可见EGFP报告基因表达的绿色荧光.ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价发现, 带LAMP组明显高于不带LAMP组(P<0.05), 且两者均高于空质粒(P-LAMP)及正常对照(N)组(P<0.01).ELISPOT检测脾细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的频率, 带LAMP组与其他组相比显著提高(P<0.01).LDH释放试验显示, 带LAMP组的特异性CTL活性高于不带LAMP组, 且均高于对照组(P<0.01).结论: 构建了针对肿瘤抗原BAP31的全长基因疫苗, 以其免疫C57BL/6小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫反应, 其中, P-L-BAP31基因疫苗各项免疫反应均优于P-BAP31.
목적: 구건중조표체재체P-BAP31화P-L-BAP31기인역묘병접충소서, 평개기유도적체액화세포면역응답.방법: 이용분자극륭기술, 구건중조질립P-BAP31화P-L-BAP31, 동시구건P-BAP31/EGFP화P-L-BAP31/EGFP중조질립, 병장기이지질체순시전염HeLa세포, 통과형광현미경관찰목적단백적표체;장중조질립P-BAP31화P-L-BAP31면역C57BL/6소서, 채용간접ELISA검측면역소서혈청중특이성항체효개;통과매련면역반점실험(ELISPOT)검측면역비세포재수도BAP31항원자격후산생IFN-γ화IL-4세포인자적빈솔;통과유산탈경매(LDH석방)시험검측소서특이성세포독성T림파세포(CTL)적응답.결과: 매절급측서결과표명, 성공구건료침대BAP31종류항원적P-BAP31화P-L-BAP31기인역묘.통과형광현미경관찰중조질립전염적HeLa세포, 가견EGFP보고기인표체적록색형광.ELISA검측면역소서혈청중특이성항체효개발현, 대LAMP조명현고우불대LAMP조(P<0.05), 차량자균고우공질립(P-LAMP)급정상대조(N)조(P<0.01).ELISPOT검측비세포분비세포인자IFN-γ화IL-4적빈솔, 대LAMP조여기타조상비현저제고(P<0.01).LDH석방시험현시, 대LAMP조적특이성CTL활성고우불대LAMP조, 차균고우대조조(P<0.01).결론: 구건료침대종류항원BAP31적전장기인역묘, 이기면역C57BL/6소서가유도특이성체액화세포면역반응, 기중, P-L-BAP31기인역묘각항면역반응균우우P-BAP31.