CAJ | 학술논문

为评价重组腺病毒融合表达猪瘟病毒(CSFV)E0和E2蛋白的免疫保护效果,本研究以CSFV基因组为模板,应用RT-PCR扩增E0和E2蛋白的编码基因,通过pET-32a载体将E0和E2基因串联,形成pET-E0-E2重组质粒.用Kpn Ⅰ和Not Ⅰ双酶切pET-E0-E2得到E0-E2融合基因,定向亚克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,采用"两步转化法"在细菌内同源重组,构建携带E0-E2基因的重组腺病毒转移载体质粒pAdEasy-E0-E2,经Pac Ⅰ酶切线性化后转染人胚胎肾细胞(HEK293),成功包装出重组腺病毒(rAd-E0-E2),PCR和western blot检测表明,E0-E2基因已重组于腺病毒基因组中并获得表达.将rAd-E0-E2接种于小鼠和猪,并通过ELISA进行抗体检测.另外,将rAd-E0-E2经肌肉2次(间隔7 d)免疫接种6周龄～7周龄猪,3周后用103TCID50CSFV石门株攻毒.结果表明,rAd-E0-E2免疫组6/7头存活,各组织器官带毒时间不超过10 d,而非重组腺病毒rAd-CMV免疫组和空白对照组全部死亡,各组织器官均能分离到CSFV.结果提示,rAd-E0-E2能使免疫猪抵抗CSFV强毒攻击,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗提供了实验依据.
위평개중조선병독융합표체저온병독(CSFV)E0화E2단백적면역보호효과,본연구이CSFV기인조위모판,응용RT-PCR확증E0화E2단백적편마기인,통과pET-32a재체장E0화E2기인천련,형성pET-E0-E2중조질립.용Kpn Ⅰ화Not Ⅰ쌍매절pET-E0-E2득도E0-E2융합기인,정향아극륭우천사재체pAdTrack-CMV중,채용"량보전화법"재세균내동원중조,구건휴대E0-E2기인적중조선병독전이재체질립pAdEasy-E0-E2,경Pac Ⅰ매절선성화후전염인배태신세포(HEK293),성공포장출중조선병독(rAd-E0-E2),PCR화western blot검측표명,E0-E2기인이중조우선병독기인조중병획득표체.장rAd-E0-E2접충우소서화저,병통과ELISA진행항체검측.령외,장rAd-E0-E2경기육2차(간격7 d)면역접충6주령～7주령저,3주후용103TCID50CSFV석문주공독.결과표명,rAd-E0-E2면역조6/7두존활,각조직기관대독시간불초과10 d,이비중조선병독rAd-CMV면역조화공백대조조전부사망,각조직기관균능분리도CSFV.결과제시,rAd-E0-E2능사면역저저항CSFV강독공격,위진일보연제저온기인공정역묘제공료실험의거.