畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
2期
306-310
,共5页
李大伟%黄灿平%张彦明%谢建华%冉智光%熊仲良%范伟兴
李大偉%黃燦平%張彥明%謝建華%冉智光%熊仲良%範偉興
리대위%황찬평%장언명%사건화%염지광%웅중량%범위흥
牛支原体%丝状支原体丝状亚种小克隆%无乳支原体%三重PCR
牛支原體%絲狀支原體絲狀亞種小剋隆%無乳支原體%三重PCR
우지원체%사상지원체사상아충소극륭%무유지원체%삼중PCR
本研究旨在建立一种可一次性区分牛支原体、丝状支原体丝状亚种小克隆和无乳支原体的三重PCR诊断方法,为临床诊断和流行病学调查提供可靠检测技术.根据GenBank发表的上述3种病原的基因组序列保守区域设计3对特异性引物建立三重PCR方法;确定其检测敏感性,以猪支原体、鸡支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆基因作模板检验其特异性;同时和病原分离鉴定结果对比其准确性.结果表明在优化体系和条件下能够同时得到扩增长度为448、549、375 bp 3条特异性片段,未扩增出猪、鸡支原体模板特异性片段;其敏感性(可检测到的最小模板DNA含量)为0.8 ng·μL-1;36份临床样品检测结果显示,三重PCR检测结果与分离培养鉴定方法一致,均能鉴定出牛支原体阳性病料.本研究建立的三重PCR诊断方法能够一次性鉴别3种支原体,具有高敏感性、特异性和准确性,可用于临床诊断和流行病学调查.
本研究旨在建立一種可一次性區分牛支原體、絲狀支原體絲狀亞種小剋隆和無乳支原體的三重PCR診斷方法,為臨床診斷和流行病學調查提供可靠檢測技術.根據GenBank髮錶的上述3種病原的基因組序列保守區域設計3對特異性引物建立三重PCR方法;確定其檢測敏感性,以豬支原體、鷄支原體、無乳支原體和絲狀支原體絲狀亞種小剋隆基因作模闆檢驗其特異性;同時和病原分離鑒定結果對比其準確性.結果錶明在優化體繫和條件下能夠同時得到擴增長度為448、549、375 bp 3條特異性片段,未擴增齣豬、鷄支原體模闆特異性片段;其敏感性(可檢測到的最小模闆DNA含量)為0.8 ng·μL-1;36份臨床樣品檢測結果顯示,三重PCR檢測結果與分離培養鑒定方法一緻,均能鑒定齣牛支原體暘性病料.本研究建立的三重PCR診斷方法能夠一次性鑒彆3種支原體,具有高敏感性、特異性和準確性,可用于臨床診斷和流行病學調查.
본연구지재건립일충가일차성구분우지원체、사상지원체사상아충소극륭화무유지원체적삼중PCR진단방법,위림상진단화류행병학조사제공가고검측기술.근거GenBank발표적상술3충병원적기인조서렬보수구역설계3대특이성인물건립삼중PCR방법;학정기검측민감성,이저지원체、계지원체、무유지원체화사상지원체사상아충소극륭기인작모판검험기특이성;동시화병원분리감정결과대비기준학성.결과표명재우화체계화조건하능구동시득도확증장도위448、549、375 bp 3조특이성편단,미확증출저、계지원체모판특이성편단;기민감성(가검측도적최소모판DNA함량)위0.8 ng·μL-1;36빈림상양품검측결과현시,삼중PCR검측결과여분리배양감정방법일치,균능감정출우지원체양성병료.본연구건립적삼중PCR진단방법능구일차성감별3충지원체,구유고민감성、특이성화준학성,가용우림상진단화류행병학조사.
