南京师大学报（自然科学版）
南京師大學報（自然科學版）
남경사대학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
2期
83-88
,共6页
茎-环RT-PCR%miRNA-421%引物设计
莖-環RT-PCR%miRNA-421%引物設計
경-배RT-PCR%miRNA-421%인물설계
本研究旨在通过茎环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.
本研究旨在通過莖環RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探討該方法在定量檢測miRNA方麵的應用價值.利用miRBase數據庫穫得miRNA-421的成熟序列.設計3條miRNA-421特異性反轉錄引物,Q-PCR上遊引物及通用下遊引物.通過10倍梯度稀釋RNA後特異性反轉錄,RT-PCR分析不同引物互相配對PCR的擴增麯線及鎔融麯線,鑒定齣特異性好、擴增效率高的引物.為進一步鑒定引物的有效性,過錶達miRNA-421,用鑒定的成熟引物定量擴增.利用莖-環RT-PCR法設計、鑒定齣miRNA-421引物:421RT7、F19,且這對引物特異性好、擴增效率高.通過設計引物組閤,莖-環RT-PCR法能夠很好地用于miRNA定量分析,併具有準確、快速、節約成本的優點.
본연구지재통과경배RT-PCR법,건립유효정량miRNA-421적PCR방법,탐토해방법재정량검측miRNA방면적응용개치.이용miRBase수거고획득miRNA-421적성숙서렬.설계3조miRNA-421특이성반전록인물,Q-PCR상유인물급통용하유인물.통과10배제도희석RNA후특이성반전록,RT-PCR분석불동인물호상배대PCR적확증곡선급용융곡선,감정출특이성호、확증효솔고적인물.위진일보감정인물적유효성,과표체miRNA-421,용감정적성숙인물정량확증.이용경-배RT-PCR법설계、감정출miRNA-421인물:421RT7、F19,차저대인물특이성호、확증효솔고.통과설계인물조합,경-배RT-PCR법능구흔호지용우miRNA정량분석,병구유준학、쾌속、절약성본적우점.
