中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2004年
12期
1045-1048,1061
,共5页
韦相才%钟兴明%郑焕钦%陈观今%王景圆
韋相纔%鐘興明%鄭煥欽%陳觀今%王景圓
위상재%종흥명%정환흠%진관금%왕경원
弓形虫%膜抗原%SAG3%基因打靶%载体
弓形蟲%膜抗原%SAG3%基因打靶%載體
궁형충%막항원%SAG3%기인타파%재체
目的构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,建立基因敲除突变株,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法.方法用基因克隆方法将 SAG3 1.53kb和 2.81kb 两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,氯霉素乙酰转移酶( CAT) 抗性基因作为筛选标记,采用电转移转染细胞方法进行基因打靶,建立突变型的弓形虫株,采用PCR、酶切分析和Southern Blot 杂交方法筛选鉴定. 结果构建了弓形虫RH株5 'SAG3-TUB5/CAT-3 ' SAG3置换型载体,获得了敲除SAG3 基因的弓形虫突变株,建立基因敲除突变株,获得了阳性的筛选克隆,经鉴定证明基因打靶结果准确.结论通过构建基因打靶载体,可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因,为进一步研究弓形虫侵入机制,探讨弓形虫病防治提供可行的方法.
目的構建弓形蟲膜抗原SAG3基因打靶載體,建立基因敲除突變株,為進一步探討SAG3功能和弓形蟲侵入宿主細胞機製提供可行的研究方法.方法用基因剋隆方法將 SAG3 1.53kb和 2.81kb 兩箇同源序列分彆插入TUB5/CAT質粒中,構建置換型打靶載體,氯黴素乙酰轉移酶( CAT) 抗性基因作為篩選標記,採用電轉移轉染細胞方法進行基因打靶,建立突變型的弓形蟲株,採用PCR、酶切分析和Southern Blot 雜交方法篩選鑒定. 結果構建瞭弓形蟲RH株5 'SAG3-TUB5/CAT-3 ' SAG3置換型載體,穫得瞭敲除SAG3 基因的弓形蟲突變株,建立基因敲除突變株,穫得瞭暘性的篩選剋隆,經鑒定證明基因打靶結果準確.結論通過構建基因打靶載體,可有目的地敲除弓形蟲膜抗原基因,為進一步研究弓形蟲侵入機製,探討弓形蟲病防治提供可行的方法.
목적구건궁형충막항원SAG3기인타파재체,건립기인고제돌변주,위진일보탐토SAG3공능화궁형충침입숙주세포궤제제공가행적연구방법.방법용기인극륭방법장 SAG3 1.53kb화 2.81kb 량개동원서렬분별삽입TUB5/CAT질립중,구건치환형타파재체,록매소을선전이매( CAT) 항성기인작위사선표기,채용전전이전염세포방법진행기인타파,건립돌변형적궁형충주,채용PCR、매절분석화Southern Blot 잡교방법사선감정. 결과구건료궁형충RH주5 'SAG3-TUB5/CAT-3 ' SAG3치환형재체,획득료고제SAG3 기인적궁형충돌변주,건립기인고제돌변주,획득료양성적사선극륭,경감정증명기인타파결과준학.결론통과구건기인타파재체,가유목적지고제궁형충막항원기인,위진일보연구궁형충침입궤제,탐토궁형충병방치제공가행적방법.
