浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2005年
2期
232-236
,共5页
陈洪勋%严兴成%应建跃%吴建祥%周继勇
陳洪勛%嚴興成%應建躍%吳建祥%週繼勇
진홍훈%엄흥성%응건약%오건상%주계용
严重急性呼吸综合征(SARS)%冠状病毒%N蛋白%单克隆抗体
嚴重急性呼吸綜閤徵(SARS)%冠狀病毒%N蛋白%單剋隆抗體
엄중급성호흡종합정(SARS)%관상병독%N단백%단극륭항체
为对SARS N蛋白的功能进行研究,并建立快速、方便的诊断方法,将已克隆、构建成功的重组质粒PGEX-4T/N转化至E.coli BL21中,IPTG诱导表达,表达产物与兔源GST多抗在66 kD处有很强的反应性,融合蛋白GST-N分别通过GSTrap FF 1 mL纯化柱和割胶纯化两种方法获得了具有生物活性和变性的融合蛋白.其蛋白浓度分别为0.85 mg/mL和0.433 mg/mL.利用纯化的GST-N蛋白免疫SPF BALB/c小鼠,获得4株能稳定传代并分泌抗SARS N单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为3E5、6B9、4C2、4B7,经Western blot分析表明,所获得的4株抗SARS N单克隆抗体与纯化的N蛋白均具有特异反应性,且不与禽冠状病毒的N蛋白发生反应.
為對SARS N蛋白的功能進行研究,併建立快速、方便的診斷方法,將已剋隆、構建成功的重組質粒PGEX-4T/N轉化至E.coli BL21中,IPTG誘導錶達,錶達產物與兔源GST多抗在66 kD處有很彊的反應性,融閤蛋白GST-N分彆通過GSTrap FF 1 mL純化柱和割膠純化兩種方法穫得瞭具有生物活性和變性的融閤蛋白.其蛋白濃度分彆為0.85 mg/mL和0.433 mg/mL.利用純化的GST-N蛋白免疫SPF BALB/c小鼠,穫得4株能穩定傳代併分泌抗SARS N單剋隆抗體(mAb)的雜交瘤細胞,分彆命名為3E5、6B9、4C2、4B7,經Western blot分析錶明,所穫得的4株抗SARS N單剋隆抗體與純化的N蛋白均具有特異反應性,且不與禽冠狀病毒的N蛋白髮生反應.
위대SARS N단백적공능진행연구,병건립쾌속、방편적진단방법,장이극륭、구건성공적중조질립PGEX-4T/N전화지E.coli BL21중,IPTG유도표체,표체산물여토원GST다항재66 kD처유흔강적반응성,융합단백GST-N분별통과GSTrap FF 1 mL순화주화할효순화량충방법획득료구유생물활성화변성적융합단백.기단백농도분별위0.85 mg/mL화0.433 mg/mL.이용순화적GST-N단백면역SPF BALB/c소서,획득4주능은정전대병분비항SARS N단극륭항체(mAb)적잡교류세포,분별명명위3E5、6B9、4C2、4B7,경Western blot분석표명,소획득적4주항SARS N단극륭항체여순화적N단백균구유특이반응성,차불여금관상병독적N단백발생반응.
