细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
3期
253-255,259
,共4页
俞丽丽%张元军%张霞%王怡波%林建波%倪健%彭艳
俞麗麗%張元軍%張霞%王怡波%林建波%倪健%彭豔
유려려%장원군%장하%왕이파%림건파%예건%팽염
hATP5B%rhATP5B%原核表达%多克隆抗体邋
hATP5B%rhATP5B%原覈錶達%多剋隆抗體邋
hATP5B%rhATP5B%원핵표체%다극륭항체랍
目的: 原核表达、纯化人F1F0-ATP合成酶β亚基(hATP5B)并制备其多克隆抗体.方法: 以人脐带静脉内皮细胞 (HUVEC) 总RNA为模板, 通过RT-PCR扩增hATP5B 成熟肽编码序列, 克隆入原核表达载体pET28a(+), 转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并诱导表达, 表达产物用Ni2+螯合层析纯化, 纯化产物用透析复性, 产物用SDS-PAGE和 Western blot进行鉴定.复性产物免疫家兔, 制备多克隆抗体; 多抗的效价用间接ELISA法检测, 并用Western blot和细胞免疫荧光分析多抗的特异性和抗原结合性.结果: 测序证实获得hATP5B成熟肽编码序列.SDS-PAGE鉴定表明, 表达、纯化、复性产物的相对分子质量(Mr)均约55 000, 与理论值相符.灰度扫描分析重组hATP5B(recombinant hATP5B, rhATP5B)的表达量占菌体蛋白总量的36.8%, 纯化产物纯度达98.3%, 复性产物纯度达99.2%.Western blot反应阳性.多抗的平均抗体效价为1∶640 000, 可特异识别HUVEC中的天然抗原.结论: 原核表达的hATP5B具有良好的免疫原性, 其免疫家兔后获得的多抗具有高效价和特异性.hATP5B的原核高效表达和其抗体制备为进一步研究hATP5B的功能奠定了实验基础.
目的: 原覈錶達、純化人F1F0-ATP閤成酶β亞基(hATP5B)併製備其多剋隆抗體.方法: 以人臍帶靜脈內皮細胞 (HUVEC) 總RNA為模闆, 通過RT-PCR擴增hATP5B 成熟肽編碼序列, 剋隆入原覈錶達載體pET28a(+), 轉化大腸桿菌E.coli BL21(DE3)併誘導錶達, 錶達產物用Ni2+螯閤層析純化, 純化產物用透析複性, 產物用SDS-PAGE和 Western blot進行鑒定.複性產物免疫傢兔, 製備多剋隆抗體; 多抗的效價用間接ELISA法檢測, 併用Western blot和細胞免疫熒光分析多抗的特異性和抗原結閤性.結果: 測序證實穫得hATP5B成熟肽編碼序列.SDS-PAGE鑒定錶明, 錶達、純化、複性產物的相對分子質量(Mr)均約55 000, 與理論值相符.灰度掃描分析重組hATP5B(recombinant hATP5B, rhATP5B)的錶達量佔菌體蛋白總量的36.8%, 純化產物純度達98.3%, 複性產物純度達99.2%.Western blot反應暘性.多抗的平均抗體效價為1∶640 000, 可特異識彆HUVEC中的天然抗原.結論: 原覈錶達的hATP5B具有良好的免疫原性, 其免疫傢兔後穫得的多抗具有高效價和特異性.hATP5B的原覈高效錶達和其抗體製備為進一步研究hATP5B的功能奠定瞭實驗基礎.
목적: 원핵표체、순화인F1F0-ATP합성매β아기(hATP5B)병제비기다극륭항체.방법: 이인제대정맥내피세포 (HUVEC) 총RNA위모판, 통과RT-PCR확증hATP5B 성숙태편마서렬, 극륭입원핵표체재체pET28a(+), 전화대장간균E.coli BL21(DE3)병유도표체, 표체산물용Ni2+오합층석순화, 순화산물용투석복성, 산물용SDS-PAGE화 Western blot진행감정.복성산물면역가토, 제비다극륭항체; 다항적효개용간접ELISA법검측, 병용Western blot화세포면역형광분석다항적특이성화항원결합성.결과: 측서증실획득hATP5B성숙태편마서렬.SDS-PAGE감정표명, 표체、순화、복성산물적상대분자질량(Mr)균약55 000, 여이론치상부.회도소묘분석중조hATP5B(recombinant hATP5B, rhATP5B)적표체량점균체단백총량적36.8%, 순화산물순도체98.3%, 복성산물순도체99.2%.Western blot반응양성.다항적평균항체효개위1∶640 000, 가특이식별HUVEC중적천연항원.결론: 원핵표체적hATP5B구유량호적면역원성, 기면역가토후획득적다항구유고효개화특이성.hATP5B적원핵고효표체화기항체제비위진일보연구hATP5B적공능전정료실험기출.
