中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
10期
95-99
,共5页
刘金华%贺丹%史艳宇%张宇%王丽
劉金華%賀丹%史豔宇%張宇%王麗
류금화%하단%사염우%장우%왕려
构巢曲霉%实时荧光PCR%检测
構巢麯黴%實時熒光PCR%檢測
구소곡매%실시형광PCR%검측
目的:根据构巢曲霉(Aspergillus nidulans)3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因特异位点设计并合成Taqman探针及引物,建立构巢曲霉实时荧光 PCR检测方法.方法:应用lasergene7.1软件对构巢曲霉与13种常见曲霉主要包括黑曲霉(A.niger)、烟曲霉(A.fumigatus)、杂色曲霉(A.versicolor)、土曲霉(A.terrus)、黄曲霉(A. flavus)、温特曲霉(A.wentii)、寄生曲霉(A. parasiticus)、泡盛曲霉(A. awamori)、米曲霉(A. oryzae )、棒曲霉(A.cavatus)、赤曲霉(A.ruber )、亮白曲霉(A.ochraceus)及赭曲霉(A.ochraceus)进行GAPDH基因序列比对分析,在特异位点设计引物和探针,建立构巢曲霉实时荧光 PCR检测方法,并对该方法进行特异性及敏感性分析.结果:用曲霉属22种41株不同曲霉及其他属的12株病原真菌验证实验表明,所建立的荧光PCR方法特异性强;检测灵敏度可达4.03×10-12μg/ml的模板DNA. 结论:应用实时荧光PCR技术能够有效检测构巢曲霉,该方法具有特异、灵敏、快速等特点,可在实际工作中应用.
目的:根據構巢麯黴(Aspergillus nidulans)3-燐痠甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因特異位點設計併閤成Taqman探針及引物,建立構巢麯黴實時熒光 PCR檢測方法.方法:應用lasergene7.1軟件對構巢麯黴與13種常見麯黴主要包括黑麯黴(A.niger)、煙麯黴(A.fumigatus)、雜色麯黴(A.versicolor)、土麯黴(A.terrus)、黃麯黴(A. flavus)、溫特麯黴(A.wentii)、寄生麯黴(A. parasiticus)、泡盛麯黴(A. awamori)、米麯黴(A. oryzae )、棒麯黴(A.cavatus)、赤麯黴(A.ruber )、亮白麯黴(A.ochraceus)及赭麯黴(A.ochraceus)進行GAPDH基因序列比對分析,在特異位點設計引物和探針,建立構巢麯黴實時熒光 PCR檢測方法,併對該方法進行特異性及敏感性分析.結果:用麯黴屬22種41株不同麯黴及其他屬的12株病原真菌驗證實驗錶明,所建立的熒光PCR方法特異性彊;檢測靈敏度可達4.03×10-12μg/ml的模闆DNA. 結論:應用實時熒光PCR技術能夠有效檢測構巢麯黴,該方法具有特異、靈敏、快速等特點,可在實際工作中應用.
목적:근거구소곡매(Aspergillus nidulans)3-린산감유철탈경매(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)기인특이위점설계병합성Taqman탐침급인물,건립구소곡매실시형광 PCR검측방법.방법:응용lasergene7.1연건대구소곡매여13충상견곡매주요포괄흑곡매(A.niger)、연곡매(A.fumigatus)、잡색곡매(A.versicolor)、토곡매(A.terrus)、황곡매(A. flavus)、온특곡매(A.wentii)、기생곡매(A. parasiticus)、포성곡매(A. awamori)、미곡매(A. oryzae )、봉곡매(A.cavatus)、적곡매(A.ruber )、량백곡매(A.ochraceus)급자곡매(A.ochraceus)진행GAPDH기인서렬비대분석,재특이위점설계인물화탐침,건립구소곡매실시형광 PCR검측방법,병대해방법진행특이성급민감성분석.결과:용곡매속22충41주불동곡매급기타속적12주병원진균험증실험표명,소건립적형광PCR방법특이성강;검측령민도가체4.03×10-12μg/ml적모판DNA. 결론:응용실시형광PCR기술능구유효검측구소곡매,해방법구유특이、령민、쾌속등특점,가재실제공작중응용.
