解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2009年
3期
414-418
,共5页
卓建新%李翔%项大业%陈日曙%张伶
卓建新%李翔%項大業%陳日曙%張伶
탁건신%리상%항대업%진일서%장령
反义cDNA%细胞周期蛋白B1%骨肉瘤%腺相关病毒%流式细胞术%人
反義cDNA%細胞週期蛋白B1%骨肉瘤%腺相關病毒%流式細胞術%人
반의cDNA%세포주기단백B1%골육류%선상관병독%류식세포술%인
目的 研究携带反义细胞周期蛋白B1(CCNB1)的腺相关病毒载体(rAAV-AS-CCNB1/Neo)对骨肉瘤细胞U2OS的细胞增殖抑制和诱导凋亡的影响. 方法 将构建的重组AAV载体pd16-95-AS-CCNB1/neo和AAV/腺病毒辅助质粒pSH3共转染HEK293细胞,得到表达AS-CCNB1的重组AAV,纯化并浓缩病毒,测定病毒滴度.用重组AAV感染人骨肉瘤U2OS细胞(感染复数为105～106 v.g./细胞),采用Western blotting、RT-PCR、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术等检测或观察重组AAV对细胞周期蛋白B1表达,瘤细胞体外增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果 成功构建rAAV-AS-CCNB1,病毒滴度为1.0×1011 v.g./ml,体外感染U2OS细胞后可明显降低其增殖活性,Western blotting和RT-PCR提示,rAAV-AS-CCNB1可抑制细胞周期蛋白B1表达,流式细胞术提示,细胞出现明显凋亡和G1期阻滞. 结论 反义CCNB1重组AAV具有明显的抗骨肉瘤U2OS细胞体外增殖作用,其作用可能与其诱导细胞凋亡和周期阻滞有关.
目的 研究攜帶反義細胞週期蛋白B1(CCNB1)的腺相關病毒載體(rAAV-AS-CCNB1/Neo)對骨肉瘤細胞U2OS的細胞增殖抑製和誘導凋亡的影響. 方法 將構建的重組AAV載體pd16-95-AS-CCNB1/neo和AAV/腺病毒輔助質粒pSH3共轉染HEK293細胞,得到錶達AS-CCNB1的重組AAV,純化併濃縮病毒,測定病毒滴度.用重組AAV感染人骨肉瘤U2OS細胞(感染複數為105～106 v.g./細胞),採用Western blotting、RT-PCR、四甲基偶氮唑鹽(MTT)法、流式細胞術等檢測或觀察重組AAV對細胞週期蛋白B1錶達,瘤細胞體外增殖、凋亡和細胞週期的影響.結果 成功構建rAAV-AS-CCNB1,病毒滴度為1.0×1011 v.g./ml,體外感染U2OS細胞後可明顯降低其增殖活性,Western blotting和RT-PCR提示,rAAV-AS-CCNB1可抑製細胞週期蛋白B1錶達,流式細胞術提示,細胞齣現明顯凋亡和G1期阻滯. 結論 反義CCNB1重組AAV具有明顯的抗骨肉瘤U2OS細胞體外增殖作用,其作用可能與其誘導細胞凋亡和週期阻滯有關.
목적 연구휴대반의세포주기단백B1(CCNB1)적선상관병독재체(rAAV-AS-CCNB1/Neo)대골육류세포U2OS적세포증식억제화유도조망적영향. 방법 장구건적중조AAV재체pd16-95-AS-CCNB1/neo화AAV/선병독보조질립pSH3공전염HEK293세포,득도표체AS-CCNB1적중조AAV,순화병농축병독,측정병독적도.용중조AAV감염인골육류U2OS세포(감염복수위105～106 v.g./세포),채용Western blotting、RT-PCR、사갑기우담서염(MTT)법、류식세포술등검측혹관찰중조AAV대세포주기단백B1표체,류세포체외증식、조망화세포주기적영향.결과 성공구건rAAV-AS-CCNB1,병독적도위1.0×1011 v.g./ml,체외감염U2OS세포후가명현강저기증식활성,Western blotting화RT-PCR제시,rAAV-AS-CCNB1가억제세포주기단백B1표체,류식세포술제시,세포출현명현조망화G1기조체. 결론 반의CCNB1중조AAV구유명현적항골육류U2OS세포체외증식작용,기작용가능여기유도세포조망화주기조체유관.
