CAJ | 학술논문

背景:针对帕金森病进行细胞移植治疗的研究进程中,除寻求合适的细胞系外,如何将各种有分化潜能的细胞诱导为含量丰富、有功能的多巴胺能神经元尤为关键.目的:观察不同浓度抗坏血酸对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-01/12在广西医科大学科学实验中心完成.材料:清洁级新生24 h内SD大鼠30只,由广西医科大学实验动物中心提供.抗坏血酸为Sigma产品.方法:取新生鼠脑组织,组织块胰蛋白酶消化法体外分离培养神经干细胞,传至第2代以5×108L-1密度接种.设立4组:空白对照组不给予抗坏血酸,仅加入含体积分数为10%的胎牛血清、2%B27的DMEM/F12培养基;剩余3组在此基础上分别加入50,100,200 μmol/L抗坏血酸进行诱导,10 d后终止诱导.主要观察指标:RT-PCR检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶基因mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞,检测神经干细胞向多巴胺能神经元分化率.结果:各浓度抗坏血酸诱导组均得到795 bp的扩增片断,即均表达酪氨酸羟化酶mRNA.神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原.与空白对照组比较,50,100,200 μ mol/L抗坏血酸诱导组酪氨酸羟化酶阳性细胞率均明显升高(P<0.05);且100,200 μ mol/L抗坏血酸诱导组升高幅度明显高于50 μ mol/L(P<0.05),100,200 μ mol/L抗坏血酸诱导组间比较无明显差异(P>0.05).结论:从新生鼠脑组织分离出的神经干细胞在体外具有自我更新、多向分化潜能及表达巢蛋白的能力.50～200 μ mol/L抗坏血酸均能促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化,抗坏血酸浓度从100 μmol/L增加至200 μmol/L时酪氨酸羟化酶阳性细胞率无明显变化.
배경:침대파금삼병진행세포이식치료적연구진정중,제심구합괄적세포계외,여하장각충유분화잠능적세포유도위함량봉부、유공능적다파알능신경원우위관건.목적:관찰불동농도항배혈산대신경간세포향다파알능신경원분화적영향.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-01/12재엄서의과대학과학실험중심완성.재료:청길급신생24 h내SD대서30지,유엄서의과대학실험동물중심제공.항배혈산위Sigma산품.방법:취신생서뇌조직,조직괴이단백매소화법체외분리배양신경간세포,전지제2대이5×108L-1밀도접충.설립4조:공백대조조불급여항배혈산,부가입함체적분수위10%적태우혈청、2%B27적DMEM/F12배양기;잉여3조재차기출상분별가입50,100,200 μmol/L항배혈산진행유도,10 d후종지유도.주요관찰지표:RT-PCR검측유도후세포락안산간화매기인mRNA적표체,면역세포화학염색감정신경간세포,검측신경간세포향다파알능신경원분화솔.결과:각농도항배혈산유도조균득도795 bp적확증편단,즉균표체락안산간화매mRNA.신경구구유자아경신화표체소단백적능력,유도분화후적세포능표체신경원、성형효질세포급소돌효질세포특이성항원.여공백대조조비교,50,100,200 μ mol/L항배혈산유도조락안산간화매양성세포솔균명현승고(P<0.05);차100,200 μ mol/L항배혈산유도조승고폭도명현고우50 μ mol/L(P<0.05),100,200 μ mol/L항배혈산유도조간비교무명현차이(P>0.05).결론:종신생서뇌조직분리출적신경간세포재체외구유자아경신、다향분화잠능급표체소단백적능력.50～200 μ mol/L항배혈산균능촉진신경간세포향다파알능신경원분화,항배혈산농도종100 μmol/L증가지200 μmol/L시락안산간화매양성세포솔무명현변화.