CAJ | 학술논문

根据GenBank登录的鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白(OmpA)基因保守区序列,设计引物和探针,建立了直接检测鸭疫里默氏杆菌的实时荧光定量PCR快速方法.10倍梯度稀释RA菌株制备DNA模板测定方法的灵敏度,结果可在8.0×103CFU/mL浓度下特异地检测出目的菌,最低能检测到RA的DNA模板为8.0拷贝/μL;对鸭源大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌进行检测,结果均为阴性,建立的实时荧光定时PCR方法特异性强.用RA菌株人工感染雏鸭,感染后定时采集咽喉拭子、泄殖腔拭子、心血、肝脏、肺脏、脑,分别用实时荧光定量PCR检测,对脏器进行病原菌分离.结果表明,1/10半数致死量接种组,感染后8 h从心血、肝脏、脑组织检测到RA核酸,16 h后全部试样呈阳性;24 h首先从肝脏分离到RA,心血、肝脏、肺脏、脑组织均分离出RA.心血和脏器RA实时荧光定量PCR阳性检出率为63.8%(51/80),RA分离率为28.8%(23/80).10个半数致死量接种组,1 h即可从咽喉拭子、心血和肝检测到RA核酸,5 h全部样品为阳性;5 h从肺和脑分离到RA.RA人工感染鸭的心血、肝脏、肺脏、脑实时荧光定量PCR阳性检出率为86.3%(69/80),RA分离率为60%(48/80).用加热裂解法提取样品RA DNA只需30 min,建立的实时荧光定量PCR检测RA只需2 h,适用于RA的快速诊断、流行病学调查、种鸭引进隔离检疫、活鸭及其产品国内市场和进出口检验检疫.
근거GenBank등록적압역리묵씨간균외막단백(OmpA)기인보수구서렬,설계인물화탐침,건립료직접검측압역리묵씨간균적실시형광정량PCR쾌속방법.10배제도희석RA균주제비DNA모판측정방법적령민도,결과가재8.0×103CFU/mL농도하특이지검측출목적균,최저능검측도RA적DNA모판위8.0고패/μL;대압원대장간균、다살성파씨간균、사문씨균、변형간균、금황색포도구균진행검측,결과균위음성,건립적실시형광정시PCR방법특이성강.용RA균주인공감염추압,감염후정시채집인후식자、설식강식자、심혈、간장、폐장、뇌,분별용실시형광정량PCR검측,대장기진행병원균분리.결과표명,1/10반수치사량접충조,감염후8 h종심혈、간장、뇌조직검측도RA핵산,16 h후전부시양정양성;24 h수선종간장분리도RA,심혈、간장、폐장、뇌조직균분리출RA.심혈화장기RA실시형광정량PCR양성검출솔위63.8%(51/80),RA분리솔위28.8%(23/80).10개반수치사량접충조,1 h즉가종인후식자、심혈화간검측도RA핵산,5 h전부양품위양성;5 h종폐화뇌분리도RA.RA인공감염압적심혈、간장、폐장、뇌실시형광정량PCR양성검출솔위86.3%(69/80),RA분리솔위60%(48/80).용가열렬해법제취양품RA DNA지수30 min,건립적실시형광정량PCR검측RA지수2 h,괄용우RA적쾌속진단、류행병학조사、충압인진격리검역、활압급기산품국내시장화진출구검험검역.