中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
36-39
,共4页
王钦富%李坤%李志%徐娜%董敏%韩慧
王欽富%李坤%李誌%徐娜%董敏%韓慧
왕흠부%리곤%리지%서나%동민%한혜
转化生长因子β%RNA,小分子干扰%MAP激酶激酶激酶类%巨噬细胞,腹膜
轉化生長因子β%RNA,小分子榦擾%MAP激酶激酶激酶類%巨噬細胞,腹膜
전화생장인자β%RNA,소분자간우%MAP격매격매격매류%거서세포,복막
目的 通过小干扰RNA(siRNA)使小鼠腹腔巨噬细胞Tak1基因沉默,观察Tak1基因对腹腔巨噬细胞细胞因子释放的影响.方法 以靶向Tak1基因的siRNA作为实验组,同时设立空白对照组,瞬时转染昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光定量PCR技术定量检测Tak1 mRNA表达水平;采用Western blotting技术测定Tak1表达抑制情况,进而实现Tak1 siRNA干扰作用的优化;并观察LPS攻击后腹腔巨噬细胞IL-1β的表达水平.结果 细胞分别转染0.6、1.2、1.6 μmol/L Takl siRNA,mRNA抑制率为69.73%、80.85%、88.78%,最佳转染浓度为1.6μmol/L.Tak1蛋白在转染48h出现良好沉默效果,以1.6 μmol/L siRNA效果最好.转染后小鼠腹腔巨噬细胞在100 ng/ml LPS刺激下,细胞因子IL-1β分泌水平明显升高(P＜0.01).结论 靶向Tak1基因的siRNA具有较好的靶基因沉默效果.
目的 通過小榦擾RNA(siRNA)使小鼠腹腔巨噬細胞Tak1基因沉默,觀察Tak1基因對腹腔巨噬細胞細胞因子釋放的影響.方法 以靶嚮Tak1基因的siRNA作為實驗組,同時設立空白對照組,瞬時轉染昆明種小鼠腹腔巨噬細胞,採用熒光定量PCR技術定量檢測Tak1 mRNA錶達水平;採用Western blotting技術測定Tak1錶達抑製情況,進而實現Tak1 siRNA榦擾作用的優化;併觀察LPS攻擊後腹腔巨噬細胞IL-1β的錶達水平.結果 細胞分彆轉染0.6、1.2、1.6 μmol/L Takl siRNA,mRNA抑製率為69.73%、80.85%、88.78%,最佳轉染濃度為1.6μmol/L.Tak1蛋白在轉染48h齣現良好沉默效果,以1.6 μmol/L siRNA效果最好.轉染後小鼠腹腔巨噬細胞在100 ng/ml LPS刺激下,細胞因子IL-1β分泌水平明顯升高(P＜0.01).結論 靶嚮Tak1基因的siRNA具有較好的靶基因沉默效果.
목적 통과소간우RNA(siRNA)사소서복강거서세포Tak1기인침묵,관찰Tak1기인대복강거서세포세포인자석방적영향.방법 이파향Tak1기인적siRNA작위실험조,동시설립공백대조조,순시전염곤명충소서복강거서세포,채용형광정량PCR기술정량검측Tak1 mRNA표체수평;채용Western blotting기술측정Tak1표체억제정황,진이실현Tak1 siRNA간우작용적우화;병관찰LPS공격후복강거서세포IL-1β적표체수평.결과 세포분별전염0.6、1.2、1.6 μmol/L Takl siRNA,mRNA억제솔위69.73%、80.85%、88.78%,최가전염농도위1.6μmol/L.Tak1단백재전염48h출현량호침묵효과,이1.6 μmol/L siRNA효과최호.전염후소서복강거서세포재100 ng/ml LPS자격하,세포인자IL-1β분비수평명현승고(P＜0.01).결론 파향Tak1기인적siRNA구유교호적파기인침묵효과.
