国外医学（医学地理分册）
國外醫學（醫學地理分冊）
국외의학（의학지리분책）
FOREIGN MEDICAL SCIENCES(SECTION OF MEDGEOGRAPHY)
2011年
2期
83-86,90
,共5页
Eppin%避孕疫苗%原核表达%纯化
Eppin%避孕疫苗%原覈錶達%純化
Eppin%피잉역묘%원핵표체%순화
目的 构建人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白的重组质粒pET28a(+)-Eppin,并研究该质粒在原核细胞中的表达及纯化.方法 本研究以人睾丸组织cDNA为模板获得人Eppin基因片段,将其插入pET28a(+)载体His6-Tag上游,构建重组质粒pET28a(+)-Eppin,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组人Eppin蛋白后,运用SDS-PAGE进行分析和鉴定.大量表达的重组Eppin蛋白经镍柱亲和层析进行纯化,并采用SDS-PAGE进行纯度分析.结果 PCR扩增出约381 bp的Eppin基因片段,双酶切及PCR鉴定证实Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子量单位约为17 ku的重组蛋白,与预期结果一致;Eppin的表达量在IPTG诱导表达4h时最高,约占菌体总蛋白的30%;重组蛋白主要在沉淀中出现,表明原核表达时重组Eppin蛋白以包涵体形式存在;经镍柱纯化后可得纯度高达95%的重组Eppin蛋白.结论 成功构建了人附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白重组质粒pET28a(+)-Eppin,该质粒在原核系统中获得了高效融合表达,进一步纯化后可得高纯度的重组蛋白,为开展免疫避孕与生殖免疫的研究奠定基础.
目的 構建人附睪蛋白酶抑製劑Eppin蛋白的重組質粒pET28a(+)-Eppin,併研究該質粒在原覈細胞中的錶達及純化.方法 本研究以人睪汍組織cDNA為模闆穫得人Eppin基因片段,將其插入pET28a(+)載體His6-Tag上遊,構建重組質粒pET28a(+)-Eppin,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達重組人Eppin蛋白後,運用SDS-PAGE進行分析和鑒定.大量錶達的重組Eppin蛋白經鎳柱親和層析進行純化,併採用SDS-PAGE進行純度分析.結果 PCR擴增齣約381 bp的Eppin基因片段,雙酶切及PCR鑒定證實Eppin基因成功插入pET28a(+)中,SDS-PAGE分析顯示錶達產物為分子量單位約為17 ku的重組蛋白,與預期結果一緻;Eppin的錶達量在IPTG誘導錶達4h時最高,約佔菌體總蛋白的30%;重組蛋白主要在沉澱中齣現,錶明原覈錶達時重組Eppin蛋白以包涵體形式存在;經鎳柱純化後可得純度高達95%的重組Eppin蛋白.結論 成功構建瞭人附睪蛋白酶抑製劑Eppin蛋白重組質粒pET28a(+)-Eppin,該質粒在原覈繫統中穫得瞭高效融閤錶達,進一步純化後可得高純度的重組蛋白,為開展免疫避孕與生殖免疫的研究奠定基礎.
목적 구건인부고단백매억제제Eppin단백적중조질립pET28a(+)-Eppin,병연구해질립재원핵세포중적표체급순화.방법 본연구이인고환조직cDNA위모판획득인Eppin기인편단,장기삽입pET28a(+)재체His6-Tag상유,구건중조질립pET28a(+)-Eppin,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체중조인Eppin단백후,운용SDS-PAGE진행분석화감정.대량표체적중조Eppin단백경얼주친화층석진행순화,병채용SDS-PAGE진행순도분석.결과 PCR확증출약381 bp적Eppin기인편단,쌍매절급PCR감정증실Eppin기인성공삽입pET28a(+)중,SDS-PAGE분석현시표체산물위분자량단위약위17 ku적중조단백,여예기결과일치;Eppin적표체량재IPTG유도표체4h시최고,약점균체총단백적30%;중조단백주요재침정중출현,표명원핵표체시중조Eppin단백이포함체형식존재;경얼주순화후가득순도고체95%적중조Eppin단백.결론 성공구건료인부고단백매억제제Eppin단백중조질립pET28a(+)-Eppin,해질립재원핵계통중획득료고효융합표체,진일보순화후가득고순도적중조단백,위개전면역피잉여생식면역적연구전정기출.
