中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2011年
8期
829-834
,共6页
李军%朱靓%郑瑞国%李海民%陈明浩%马俊%窦科峰
李軍%硃靚%鄭瑞國%李海民%陳明浩%馬俊%竇科峰
리군%주정%정서국%리해민%진명호%마준%두과봉
Linamarase%自杀基因%酶-前药体系%原发性肝癌
Linamarase%自殺基因%酶-前藥體繫%原髮性肝癌
Linamarase%자살기인%매-전약체계%원발성간암
目的 构建含木薯linamarase(lis)基因的稳定转染肝癌细胞系,并对其生物学特性进行研究.方法 应用PCR法从木薯的DNA中扩增出lis基因,将其克隆至pcDNA3.1(+)质粒中,构建重组质粒pcDNA3.1/lis.通过脂质体法将其转染人肝癌细胞系HepG2,进行G418筛选,获得稳定转染的肝癌细胞系HepG2/lis,通过免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot法鉴定lis在细胞中的表达;采用Lambert法对细胞内lis酶的活性进行分析;采用MTT法观察稳定转染细胞系生长曲线,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠成瘤实验分析其体内成瘤特性.结果 lis基因能稳定整合于真核细胞中,并包装出具备β-葡萄糖苷酶活性的蛋白.lis在细胞中的稳定表达对细胞形态、生长特性、细胞周期、体内成瘤性等生物学特征并无明显影响.结论 成功构建含lis基因的稳定转染肝癌细胞系,为将lis自杀基因系统应用于肝癌的治疗提供了实验基础.
目的 構建含木藷linamarase(lis)基因的穩定轉染肝癌細胞繫,併對其生物學特性進行研究.方法 應用PCR法從木藷的DNA中擴增齣lis基因,將其剋隆至pcDNA3.1(+)質粒中,構建重組質粒pcDNA3.1/lis.通過脂質體法將其轉染人肝癌細胞繫HepG2,進行G418篩選,穫得穩定轉染的肝癌細胞繫HepG2/lis,通過免疫熒光染色、RT-PCR和Western blot法鑒定lis在細胞中的錶達;採用Lambert法對細胞內lis酶的活性進行分析;採用MTT法觀察穩定轉染細胞繫生長麯線,流式細胞儀分析細胞週期,裸鼠成瘤實驗分析其體內成瘤特性.結果 lis基因能穩定整閤于真覈細胞中,併包裝齣具備β-葡萄糖苷酶活性的蛋白.lis在細胞中的穩定錶達對細胞形態、生長特性、細胞週期、體內成瘤性等生物學特徵併無明顯影響.結論 成功構建含lis基因的穩定轉染肝癌細胞繫,為將lis自殺基因繫統應用于肝癌的治療提供瞭實驗基礎.
목적 구건함목서linamarase(lis)기인적은정전염간암세포계,병대기생물학특성진행연구.방법 응용PCR법종목서적DNA중확증출lis기인,장기극륭지pcDNA3.1(+)질립중,구건중조질립pcDNA3.1/lis.통과지질체법장기전염인간암세포계HepG2,진행G418사선,획득은정전염적간암세포계HepG2/lis,통과면역형광염색、RT-PCR화Western blot법감정lis재세포중적표체;채용Lambert법대세포내lis매적활성진행분석;채용MTT법관찰은정전염세포계생장곡선,류식세포의분석세포주기,라서성류실험분석기체내성류특성.결과 lis기인능은정정합우진핵세포중,병포장출구비β-포도당감매활성적단백.lis재세포중적은정표체대세포형태、생장특성、세포주기、체내성류성등생물학특정병무명현영향.결론 성공구건함lis기인적은정전염간암세포계,위장lis자살기인계통응용우간암적치료제공료실험기출.
