CAJ | 학술논문

该研究采用NCBI蛋白分析软件对Cry2Ad2蛋白序列进行分析,采用PCR克隆获得3种不同长度的cry2Ad2及全长cry2A d2基因片段,并将这些基因片段克隆到pET-26b载体上,构建重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3,再导人大肠杆菌BL21(DE3)中进行细胞周质诱导表达,并采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾的毒力.Cry2Ad2蛋白的序列分析结果表明:全长的Cry2Ad2蛋白包含两个保守区域domain I(第53位～第264位氨基酸)和domainⅡ(第267位～第472位氨基酸),推测保守活性片段C端末端在N-端的第472位与第633位氨基酸之间.重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳验证分别含有约70000、52000、51000和54000的表达蛋白.生物活性初步测定结果表明:表达的Cry2Ad2、Cry2Ad2-1、Cry2Ad2-2及Cry2Ad2-3给药72h后对小菜蛾都具有杀虫活性,其中蛋白Cry2Ad2、Cry2Ad2-2与Cry2Ad2-3对小菜蛾有较强的毒性,相同剂量致死率分别为64.35％、53.27％和61.66％,统计分析表明蛋白Cry2Ad2-1与Cry2Ad2-3的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率无显著差异,(P＞0.05)；蛋白Cry2Ad2-2对小菜蛾的毒力相对较低,相同剂量致死率为39.89％,蛋白Cry2Ad2-2的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率差异显著(P＜0.05).鉴此,初步推断Cry2Ad2蛋白对小菜蛾的活性区在第49位与第463位氨基酸之间.
해연구채용NCBI단백분석연건대Cry2Ad2단백서렬진행분석,채용PCR극륭획득3충불동장도적cry2Ad2급전장cry2A d2기인편단,병장저사기인편단극륭도pET-26b재체상,구건중조질립pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2화pET-Ad3,재도인대장간균BL21(DE3)중진행세포주질유도표체,병채용실내생물측정법측정표체산물대소채아적독력.Cry2Ad2단백적서렬분석결과표명:전장적Cry2Ad2단백포함량개보수구역domain I(제53위～제264위안기산)화domainⅡ(제267위～제472위안기산),추측보수활성편단C단말단재N-단적제472위여제633위안기산지간.중조질립pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2화pET-Ad3재대장간균BL21(DE3)중,경IPTG유도표체,SDS-PAGE전영험증분별함유약70000、52000、51000화54000적표체단백.생물활성초보측정결과표명:표체적Cry2Ad2、Cry2Ad2-1、Cry2Ad2-2급Cry2Ad2-3급약72h후대소채아도구유살충활성,기중단백Cry2Ad2、Cry2Ad2-2여Cry2Ad2-3대소채아유교강적독성,상동제량치사솔분별위64.35％、53.27％화61.66％,통계분석표명단백Cry2Ad2-1여Cry2Ad2-3적치사솔여단백Cry2Ad2적치사솔무현저차이,(P＞0.05)；단백Cry2Ad2-2대소채아적독력상대교저,상동제량치사솔위39.89％,단백Cry2Ad2-2적치사솔여단백Cry2Ad2적치사솔차이현저(P＜0.05).감차,초보추단Cry2Ad2단백대소채아적활성구재제49위여제463위안기산지간.