CAJ | 학술논문

目的:通过过表达手段上调细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白1(CDK2-AP1)基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,并观察其对MCF-7细胞生长和细胞周期调控的作用.方法:将CDK2-AP1基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MCF-7细胞,应用实时定量PCR和Western印迹验证CDK2-AP1基因mRNA和蛋白的表达效率.利用MTT法绘制生长曲线、克隆形成实验观察CDK2-AP1基因过表达后MCF-7细胞生长的变化,PI染色流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的改变.通过Western印迹检测CDK2-AP1过表达后,细胞周期相关蛋白(CDK2,CDK4,P16Ink4A,P21Cipl/Wafl)的表达.结果:过表达CDK2-AP1基因的慢病毒感染MCF-7细胞可上调其mRNA表达6.94倍,蛋白表达也十分显著地增高,两者相一致.生长曲线显示MCF-7细胞过表达CDK2-AP1基因后,增殖能力显著降低(P＜0.05)；克隆形成实验表明,其形成的克隆数目同样显著减少(P＜0.05)；流式细胞仪检测证实MCF-7细胞过表达CDK2-AP1能够使细胞周期出现G1期阻滞,并且出现凋亡峰；CDK2-AP1基因表达上调导致P21Cipl/Wafl和P 16Ink4A蛋白表达上调,CDK2和CDK4蛋白表达下调.结论:CDK2-AP1基因具有抑癌基因的功能,在乳腺癌MCF-7细胞过表达该基因能够抑制细胞的生长和克隆形成能力,并且使细胞阻滞于G1期.
목적:통과과표체수단상조세포주기조절단백의뢰성격매2-관련단백1(CDK2-AP1)기인재유선암세포MCF-7중적표체,병관찰기대MCF-7세포생장화세포주기조공적작용.방법:장CDK2-AP1기인적편마광구건우만병독표체재체,도입MCF-7세포,응용실시정량PCR화Western인적험증CDK2-AP1기인mRNA화단백적표체효솔.이용MTT법회제생장곡선、극륭형성실험관찰CDK2-AP1기인과표체후MCF-7세포생장적변화,PI염색류식세포의검측MCF-7세포주기적개변.통과Western인적검측CDK2-AP1과표체후,세포주기상관단백(CDK2,CDK4,P16Ink4A,P21Cipl/Wafl)적표체.결과:과표체CDK2-AP1기인적만병독감염MCF-7세포가상조기mRNA표체6.94배,단백표체야십분현저지증고,량자상일치.생장곡선현시MCF-7세포과표체CDK2-AP1기인후,증식능력현저강저(P＜0.05)；극륭형성실험표명,기형성적극륭수목동양현저감소(P＜0.05)；류식세포의검측증실MCF-7세포과표체CDK2-AP1능구사세포주기출현G1기조체,병차출현조망봉；CDK2-AP1기인표체상조도치P21Cipl/Wafl화P 16Ink4A단백표체상조,CDK2화CDK4단백표체하조.결론:CDK2-AP1기인구유억암기인적공능,재유선암MCF-7세포과표체해기인능구억제세포적생장화극륭형성능력,병차사세포조체우G1기.