中华肿瘤杂志
中華腫瘤雜誌
중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2011年
11期
810-815
,共6页
郭毅%张晓光%赵楠%李天人%李慧
郭毅%張曉光%趙楠%李天人%李慧
곽의%장효광%조남%리천인%리혜
基因,Gemin3%基因,p53%细胞凋亡%RNA干扰
基因,Gemin3%基因,p53%細胞凋亡%RNA榦擾
기인,Gemin3%기인,p53%세포조망%RNA간우
Genes,Gemin3%Genes,p53%Apoptosis%RNA interference
目的 探讨Gemin3基因表达在细胞凋亡中的作用及途径.方法 采用免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相瓦作用的结构域.荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响,依靠慢病毒载体介导小干扰RNA敲低Gemin3基因的表达,并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系,实时定量PCR检测Gemin3敲低对p53及其下游基因在转录水平的影响,流式细胞术检测Gemin3敲低对细胞凋亡的影响.结果 Gemin3的C端与p53的中部DNA部位相互结合.将p53报告基因、p53蛋白基因以及逐渐增量的Gemin3基因共转染Saos-2细胞,随着Gemin3质粒转染浓度的增高,p53介导的报告基因表达水平逐渐降低,Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达.实时定量PCR结果显示,与对照细胞比较,Gemin3敲低细胞中,p53、p21和Bax mRNA的表达水平明显增高.Western blot检测结果显示,Gemin3敲低细胞中,p53的表达明显升高.流式细胞术检测结果显示,敲低Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加.结论 Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达阻碍细胞凋亡.
目的 探討Gemin3基因錶達在細胞凋亡中的作用及途徑.方法 採用免疫共沉澱、穀胱甘肽-S轉移酶共沉澱實驗確定Gemin3與p53兩種蛋白在體內、體外相互結閤及相瓦作用的結構域.熒光素酶報告基因檢測轉染Gemin3基因對p53基因的影響,依靠慢病毒載體介導小榦擾RNA敲低Gemin3基因的錶達,併經嘌呤黴素篩選穫得穩定的Gemin3低錶達細胞繫,實時定量PCR檢測Gemin3敲低對p53及其下遊基因在轉錄水平的影響,流式細胞術檢測Gemin3敲低對細胞凋亡的影響.結果 Gemin3的C耑與p53的中部DNA部位相互結閤.將p53報告基因、p53蛋白基因以及逐漸增量的Gemin3基因共轉染Saos-2細胞,隨著Gemin3質粒轉染濃度的增高,p53介導的報告基因錶達水平逐漸降低,Gemin3在轉錄水平抑製p53基因的錶達.實時定量PCR結果顯示,與對照細胞比較,Gemin3敲低細胞中,p53、p21和Bax mRNA的錶達水平明顯增高.Western blot檢測結果顯示,Gemin3敲低細胞中,p53的錶達明顯升高.流式細胞術檢測結果顯示,敲低Gemin3基因的錶達導緻細胞凋亡的增加.結論 Gemin3與p53相互結閤併通過抑製p53的錶達阻礙細胞凋亡.
목적 탐토Gemin3기인표체재세포조망중적작용급도경.방법 채용면역공침정、곡광감태-S전이매공침정실험학정Gemin3여p53량충단백재체내、체외상호결합급상와작용적결구역.형광소매보고기인검측전염Gemin3기인대p53기인적영향,의고만병독재체개도소간우RNA고저Gemin3기인적표체,병경표령매소사선획득은정적Gemin3저표체세포계,실시정량PCR검측Gemin3고저대p53급기하유기인재전록수평적영향,류식세포술검측Gemin3고저대세포조망적영향.결과 Gemin3적C단여p53적중부DNA부위상호결합.장p53보고기인、p53단백기인이급축점증량적Gemin3기인공전염Saos-2세포,수착Gemin3질립전염농도적증고,p53개도적보고기인표체수평축점강저,Gemin3재전록수평억제p53기인적표체.실시정량PCR결과현시,여대조세포비교,Gemin3고저세포중,p53、p21화Bax mRNA적표체수평명현증고.Western blot검측결과현시,Gemin3고저세포중,p53적표체명현승고.류식세포술검측결과현시,고저Gemin3기인적표체도치세포조망적증가.결론 Gemin3여p53상호결합병통과억제p53적표체조애세포조망.
Objective To investigate the role of Gemin3 in cell proliferation and its regulation pathway.Methods Using co-immunoprecipitation and GST pull-down assay to determine the domain of Gemin3 and p53 binding and interaction in vitro and in vivo.To check the effect of Gemin3 on p53 by luciferase reporter assay.Stable Gemin3 knock-down cell lines were generated by lentivirus-delivered small hairpin RNA then puromycin selection.Real-time PCR was used to confirm the effect of Gemin3 level on p53 and its downstream genes,and flow cytometry was used to analyze the effect of Gemin3 on apoptosis.Results The C-terminal of Cemin3 interacted with the DNA binding domain of p53.The p53 reporter gene,PA3Mp53 and increasing amount of GFP-Gemin3 were co-transfected into Saos-2 cells.Gemin3 repressed p53 expression at transcription level.Real-time PCR indicated that the expression of p53,p21 and Bax in Gemin3 knock-down cells was higher than that in the control cells.Western blot showed Gemin3 knock-down cells had a higher p53 espression.Flow cytometric assay showed that knock-down Gemin3 expression led to an increased cell apoptosis.Conclusion Gemin3 binds with p53 forming a complex and plays an antiapoptotic role by repressing the p53 expression.
