微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2004年
3期
286-290
,共5页
韦栋平%刘玉良%邵卫星%卢建红%刘秀梵
韋棟平%劉玉良%邵衛星%盧建紅%劉秀梵
위동평%류옥량%소위성%로건홍%류수범
新城疫病毒%H9亚型禽流感病毒%重组鸡痘病毒%融合蛋白%血凝素
新城疫病毒%H9亞型禽流感病毒%重組鷄痘病毒%融閤蛋白%血凝素
신성역병독%H9아형금류감병독%중조계두병독%융합단백%혈응소
应用RT-PCR扩增出新城疫病毒F48E8株融合蛋白(F)基因,将其克隆入pGEM-T easy vector构建重组质粒pGEM-TF并进行测序确证.分别从pGEM-T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株(A/chicken/china/F/1998)血凝素(HA)基因,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE/L和合成启动子PS调控.最后将P11-LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF,用以转染已预先感染鸡痘病毒282E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞(CEF).通过在含有X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒.PCR和Southern blot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白.
應用RT-PCR擴增齣新城疫病毒F48E8株融閤蛋白(F)基因,將其剋隆入pGEM-T easy vector構建重組質粒pGEM-TF併進行測序確證.分彆從pGEM-T和pUCHA切下F基因和H9亞型禽流感病毒F株(A/chicken/china/F/1998)血凝素(HA)基因,通過一繫列分子生物學操作步驟插入到質粒pFPV7S中的鷄痘病毒基因組複製非必需片段構建重組質粒p7SHF,其中F基因和HA基因分彆由鷄痘病毒啟動子PE/L和閤成啟動子PS調控.最後將P11-LacZ報告基因錶達盒插入質粒p7SHF穫得轉移載體pFPVHF,用以轉染已預先感染鷄痘病毒282E4疫苗株的鷄胚成纖維細胞(CEF).通過在含有X-Gal的營養瓊脂上連續挑選藍色病毒蝕斑穫得併純化重組病毒.PCR和Southern blot檢測證實瞭F基因和HA基因已插入鷄痘病毒的基因組;間接免疫熒光試驗結果錶明重組病毒能夠同時正確錶達HA和F蛋白.
응용RT-PCR확증출신성역병독F48E8주융합단백(F)기인,장기극륭입pGEM-T easy vector구건중조질립pGEM-TF병진행측서학증.분별종pGEM-T화pUCHA절하F기인화H9아형금류감병독F주(A/chicken/china/F/1998)혈응소(HA)기인,통과일계렬분자생물학조작보취삽입도질립pFPV7S중적계두병독기인조복제비필수편단구건중조질립p7SHF,기중F기인화HA기인분별유계두병독계동자PE/L화합성계동자PS조공.최후장P11-LacZ보고기인표체합삽입질립p7SHF획득전이재체pFPVHF,용이전염이예선감염계두병독282E4역묘주적계배성섬유세포(CEF).통과재함유X-Gal적영양경지상련속도선람색병독식반획득병순화중조병독.PCR화Southern blot검측증실료F기인화HA기인이삽입계두병독적기인조;간접면역형광시험결과표명중조병독능구동시정학표체HA화F단백.
