医药论坛杂志
醫藥論罈雜誌
의약론단잡지
JOURNAL OF MEDICAL FORUM
2006年
16期
7-9,11
,共4页
铜锌超氧化物歧化酶%分泌表达%大肠杆菌
銅鋅超氧化物歧化酶%分泌錶達%大腸桿菌
동자초양화물기화매%분비표체%대장간균
目的 获得高表达人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的工程菌.方法 采用RT-PCR技术从人胃组织总RNA中分离扩增了hCu/Zn-SOD的cDNA序列,将该基因重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建了表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达.采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析其活性.结果 该工程菌可高表达一相对分子质量大约16kD的蛋白,与抗人Cu/Zn-SOD多克隆抗体有特异的免疫反应,表达量可达菌体可溶性蛋白的20%以上,且具有特异性SOD酶活性.结论 该菌株分泌表达了有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,为大量制备hCu/Zn-SOD和下一步研究工作奠定了基础.
目的 穫得高錶達人銅鋅超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的工程菌.方法 採用RT-PCR技術從人胃組織總RNA中分離擴增瞭hCu/Zn-SOD的cDNA序列,將該基因重組到T7啟動子控製下的分泌型錶達載體pET22b(+)中,構建瞭錶達質粒pETSOD,併轉化大腸桿菌BL21(DE3)進行誘導錶達.採用SDS-PAGE、蛋白質免疫印跡分析其活性.結果 該工程菌可高錶達一相對分子質量大約16kD的蛋白,與抗人Cu/Zn-SOD多剋隆抗體有特異的免疫反應,錶達量可達菌體可溶性蛋白的20%以上,且具有特異性SOD酶活性.結論 該菌株分泌錶達瞭有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,為大量製備hCu/Zn-SOD和下一步研究工作奠定瞭基礎.
목적 획득고표체인동자초양화물기화매(hCu/Zn-SOD)적공정균.방법 채용RT-PCR기술종인위조직총RNA중분리확증료hCu/Zn-SOD적cDNA서렬,장해기인중조도T7계동자공제하적분비형표체재체pET22b(+)중,구건료표체질립pETSOD,병전화대장간균BL21(DE3)진행유도표체.채용SDS-PAGE、단백질면역인적분석기활성.결과 해공정균가고표체일상대분자질량대약16kD적단백,여항인Cu/Zn-SOD다극륭항체유특이적면역반응,표체량가체균체가용성단백적20%이상,차구유특이성SOD매활성.결론 해균주분비표체료유천연매활성적hCu/Zn-SOD,위대량제비hCu/Zn-SOD화하일보연구공작전정료기출.
