河南医学研究
河南醫學研究
하남의학연구
HENAN MEDICAL RESEARCH
2007年
1期
25-33
,共9页
刘鹏%关怀敏%解金红%刘瑞云%曹林生%李靖%王枫岭
劉鵬%關懷敏%解金紅%劉瑞雲%曹林生%李靖%王楓嶺
류붕%관부민%해금홍%류서운%조림생%리정%왕풍령
心肌梗死%动物模型%基因转染%基因治疗%心包腔%猪
心肌梗死%動物模型%基因轉染%基因治療%心包腔%豬
심기경사%동물모형%기인전염%기인치료%심포강%저
目的:探讨经心包腔途径转染血管新生基因对缺血心肌的血管生成及舒缩功能的影响.方法:第一部分:随机将12头中国小型猪分为实验组和对照组,每组6头.两组猪均采用球囊堵塞前降支第一对角支远端以建立心肌梗死模型,心肌梗死模型建立后即刻,采用经皮剑突下穿刺方法,将中心静脉导管插入心包腔内转染Ad-LacZ.以胶原酶1200 u及透明质酸酶3000u预处理心包后,在心包腔内注射含Ad-LacZ基因2.0×109pfu.对照组心包腔内注射生理盐水.分别于注射后3天、7天及28天处死动物.对缺血心肌进行染色及病理观察.第二部分:随机将20头中国小型猪分为实验组和对照组,每组10头,每组又分3天(n=2)、7天(n=6)及28天(n=6)三个亚组.注射后3天、7天及28天分别用免疫组化、超声心动图对缺血心肌血管新生情况进行检测,并以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆、心包及心肌组织中Ad-VEGF165的表达.第三部分:20头小型猪随机分为心包转染组(心包组)和冠脉转染组(冠脉组).心包组和冠脉组均注射Ad-VEGF1651.0 ml(2×109pfu),于注射前及其后3、7、28天分别测定组织内VEGF水平、微血管密度(MVD)、心功能.结果:①实验组注射Ad-LacZ基因后第3天、第7天及28天后X-gal染色有阳性细胞.以第7天最明显,对照组无阳性细胞.②Ad-VEGF165基因经心包腔转染缺血心肌组织后,在心包及组织中成高表达,于7天达到高峰,28天降至基线水平,血浆中无目的基因的表达;28天时,实验组缺血心肌微血管密度(MVD)、心功能均明显高于对照组[MVD,517.0±75.7/mm2 v8 226.5±54.1/mm2,P=0.009:LVEF72.11±5.2% vs 55.14±4.37%,P=0.005].③心包组和冠脉组的心脏均表达有VEGF165基因,组织内VEGF水平在7天时达高峰,28天时降至基线水平,前组高于后组(702±85pg/ml vs 592±59 ps/ml,P=0.026).而两组的MVD、心功能随转染时间延长均明显增加,但心包组优于冠脉组(28d,MVD,517.0±75.7/mm2 vs 326.4±24.1/mm2,P=0.001;FS,32.9±2.2% vs 30.6±2.1%,P=0.049;LVEF,72.11±5.2% vs 65.87±2.16%,P=0.034).结论:①应用球囊堵塞法可成功建立猪急性心肌梗死模型.胶原酶及透明质酸酶预处理心包后,腺病毒载体可转染缺血心肌,并持续表达4周.②用胶原酶及透明质酸酶预处理心包腔后,经其转染Ad-VEGF165可以诱导急性心肌梗死模型局部VEGF蛋白表达,促进缺血心肌组织血管新生并能改善心功能.③导管介导的心包腔与冠脉转染Ad-VEGF165基因治疗心肌缺血是有效的、切实可行的,而前者可能是更有前途的新方法.
目的:探討經心包腔途徑轉染血管新生基因對缺血心肌的血管生成及舒縮功能的影響.方法:第一部分:隨機將12頭中國小型豬分為實驗組和對照組,每組6頭.兩組豬均採用毬囊堵塞前降支第一對角支遠耑以建立心肌梗死模型,心肌梗死模型建立後即刻,採用經皮劍突下穿刺方法,將中心靜脈導管插入心包腔內轉染Ad-LacZ.以膠原酶1200 u及透明質痠酶3000u預處理心包後,在心包腔內註射含Ad-LacZ基因2.0×109pfu.對照組心包腔內註射生理鹽水.分彆于註射後3天、7天及28天處死動物.對缺血心肌進行染色及病理觀察.第二部分:隨機將20頭中國小型豬分為實驗組和對照組,每組10頭,每組又分3天(n=2)、7天(n=6)及28天(n=6)三箇亞組.註射後3天、7天及28天分彆用免疫組化、超聲心動圖對缺血心肌血管新生情況進行檢測,併以酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血漿、心包及心肌組織中Ad-VEGF165的錶達.第三部分:20頭小型豬隨機分為心包轉染組(心包組)和冠脈轉染組(冠脈組).心包組和冠脈組均註射Ad-VEGF1651.0 ml(2×109pfu),于註射前及其後3、7、28天分彆測定組織內VEGF水平、微血管密度(MVD)、心功能.結果:①實驗組註射Ad-LacZ基因後第3天、第7天及28天後X-gal染色有暘性細胞.以第7天最明顯,對照組無暘性細胞.②Ad-VEGF165基因經心包腔轉染缺血心肌組織後,在心包及組織中成高錶達,于7天達到高峰,28天降至基線水平,血漿中無目的基因的錶達;28天時,實驗組缺血心肌微血管密度(MVD)、心功能均明顯高于對照組[MVD,517.0±75.7/mm2 v8 226.5±54.1/mm2,P=0.009:LVEF72.11±5.2% vs 55.14±4.37%,P=0.005].③心包組和冠脈組的心髒均錶達有VEGF165基因,組織內VEGF水平在7天時達高峰,28天時降至基線水平,前組高于後組(702±85pg/ml vs 592±59 ps/ml,P=0.026).而兩組的MVD、心功能隨轉染時間延長均明顯增加,但心包組優于冠脈組(28d,MVD,517.0±75.7/mm2 vs 326.4±24.1/mm2,P=0.001;FS,32.9±2.2% vs 30.6±2.1%,P=0.049;LVEF,72.11±5.2% vs 65.87±2.16%,P=0.034).結論:①應用毬囊堵塞法可成功建立豬急性心肌梗死模型.膠原酶及透明質痠酶預處理心包後,腺病毒載體可轉染缺血心肌,併持續錶達4週.②用膠原酶及透明質痠酶預處理心包腔後,經其轉染Ad-VEGF165可以誘導急性心肌梗死模型跼部VEGF蛋白錶達,促進缺血心肌組織血管新生併能改善心功能.③導管介導的心包腔與冠脈轉染Ad-VEGF165基因治療心肌缺血是有效的、切實可行的,而前者可能是更有前途的新方法.
목적:탐토경심포강도경전염혈관신생기인대결혈심기적혈관생성급서축공능적영향.방법:제일부분:수궤장12두중국소형저분위실험조화대조조,매조6두.량조저균채용구낭도새전강지제일대각지원단이건립심기경사모형,심기경사모형건립후즉각,채용경피검돌하천자방법,장중심정맥도관삽입심포강내전염Ad-LacZ.이효원매1200 u급투명질산매3000u예처리심포후,재심포강내주사함Ad-LacZ기인2.0×109pfu.대조조심포강내주사생리염수.분별우주사후3천、7천급28천처사동물.대결혈심기진행염색급병리관찰.제이부분:수궤장20두중국소형저분위실험조화대조조,매조10두,매조우분3천(n=2)、7천(n=6)급28천(n=6)삼개아조.주사후3천、7천급28천분별용면역조화、초성심동도대결혈심기혈관신생정황진행검측,병이매련면역흡부시험(ELISA)검측혈장、심포급심기조직중Ad-VEGF165적표체.제삼부분:20두소형저수궤분위심포전염조(심포조)화관맥전염조(관맥조).심포조화관맥조균주사Ad-VEGF1651.0 ml(2×109pfu),우주사전급기후3、7、28천분별측정조직내VEGF수평、미혈관밀도(MVD)、심공능.결과:①실험조주사Ad-LacZ기인후제3천、제7천급28천후X-gal염색유양성세포.이제7천최명현,대조조무양성세포.②Ad-VEGF165기인경심포강전염결혈심기조직후,재심포급조직중성고표체,우7천체도고봉,28천강지기선수평,혈장중무목적기인적표체;28천시,실험조결혈심기미혈관밀도(MVD)、심공능균명현고우대조조[MVD,517.0±75.7/mm2 v8 226.5±54.1/mm2,P=0.009:LVEF72.11±5.2% vs 55.14±4.37%,P=0.005].③심포조화관맥조적심장균표체유VEGF165기인,조직내VEGF수평재7천시체고봉,28천시강지기선수평,전조고우후조(702±85pg/ml vs 592±59 ps/ml,P=0.026).이량조적MVD、심공능수전염시간연장균명현증가,단심포조우우관맥조(28d,MVD,517.0±75.7/mm2 vs 326.4±24.1/mm2,P=0.001;FS,32.9±2.2% vs 30.6±2.1%,P=0.049;LVEF,72.11±5.2% vs 65.87±2.16%,P=0.034).결론:①응용구낭도새법가성공건립저급성심기경사모형.효원매급투명질산매예처리심포후,선병독재체가전염결혈심기,병지속표체4주.②용효원매급투명질산매예처리심포강후,경기전염Ad-VEGF165가이유도급성심기경사모형국부VEGF단백표체,촉진결혈심기조직혈관신생병능개선심공능.③도관개도적심포강여관맥전염Ad-VEGF165기인치료심기결혈시유효적、절실가행적,이전자가능시경유전도적신방법.
