细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
5期
416-419
,共4页
刘家云%龙铟%马越云%丁振若%于文彬%苏明权%郝晓柯
劉傢雲%龍銦%馬越雲%丁振若%于文彬%囌明權%郝曉柯
류가운%룡인%마월운%정진약%우문빈%소명권%학효가
杀菌/通透性增强蛋白%逆转录PCR%真核表达
殺菌/通透性增彊蛋白%逆轉錄PCR%真覈錶達
살균/통투성증강단백%역전록PCR%진핵표체
目的:获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI 结构和功能的研究提供有力的工具.方法:提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPI N端基因片段,将其克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和序列测定,然后亚克隆入质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI;重组载体通过脂质体转染CHO细胞并筛选阳性克隆,免疫荧光法鉴定重组BPI的表达和免疫学活性.结果:酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异.转染筛选的阳性CHO细胞克隆表达产物能够被抗BPI的单克隆抗体所识别.结论:BPI活性片段表达载体的构建及真核表达成功,为BPI功能的研究奠定了基础.
目的:穫得人殺菌/通透性增彊蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N耑活性片段蛋白,為BPI 結構和功能的研究提供有力的工具.方法:提取人外週血多形覈白細胞(PMN)總RNA進行逆轉錄反應,經套式PCR擴增齣BPI N耑基因片段,將其剋隆入pUC19載體中併進行酶切鑒定和序列測定,然後亞剋隆入質粒pcDNA3構建真覈錶達載體pcDNA-BPI;重組載體通過脂質體轉染CHO細胞併篩選暘性剋隆,免疫熒光法鑒定重組BPI的錶達和免疫學活性.結果:酶切鑒定和序列分析證實重組質粒含有包括信號肽在內的BPI活性片段編碼序列,與文獻報道的序列相比,有6箇覈苷痠差異.轉染篩選的暘性CHO細胞剋隆錶達產物能夠被抗BPI的單剋隆抗體所識彆.結論:BPI活性片段錶達載體的構建及真覈錶達成功,為BPI功能的研究奠定瞭基礎.
목적:획득인살균/통투성증강단백(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N단활성편단단백,위BPI 결구화공능적연구제공유력적공구.방법:제취인외주혈다형핵백세포(PMN)총RNA진행역전록반응,경투식PCR확증출BPI N단기인편단,장기극륭입pUC19재체중병진행매절감정화서렬측정,연후아극륭입질립pcDNA3구건진핵표체재체pcDNA-BPI;중조재체통과지질체전염CHO세포병사선양성극륭,면역형광법감정중조BPI적표체화면역학활성.결과:매절감정화서렬분석증실중조질립함유포괄신호태재내적BPI활성편단편마서렬,여문헌보도적서렬상비,유6개핵감산차이.전염사선적양성CHO세포극륭표체산물능구피항BPI적단극륭항체소식별.결론:BPI활성편단표체재체적구건급진핵표체성공,위BPI공능적연구전정료기출.
