中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2007年
3期
55-59
,共5页
韩威%李碧春%朱云芬%秦洁%周冠月%陈国宏%张学余
韓威%李碧春%硃雲芬%秦潔%週冠月%陳國宏%張學餘
한위%리벽춘%주운분%진길%주관월%진국굉%장학여
鸡%原始生殖细胞%慢速冷冻保存%玻璃化冷冻保存%培养传代
鷄%原始生殖細胞%慢速冷凍保存%玻璃化冷凍保存%培養傳代
계%원시생식세포%만속냉동보존%파리화냉동보존%배양전대
本研究对发育至第19期的鸡胚性腺原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离提纯后,在DMEM中添加冷冻保护剂DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)分别组成6种慢速冷冻保护液和6种玻璃化冷冻保护液,进行超低温冷冻保存.复苏后苔盼蓝染色测定细胞存活率,体外接种培养、传代.结果:①慢速冷冻保存中,PGCs在慢速冷冻液V(10%EG+10% FBS+0.1 mol/L蔗糖)条件下复苏后存活率最高(92.20%),且与慢速冷冻液Ⅰ(10% DMSO+10% FBS)存活率之间差异显著(P＜0.05).②玻璃化冷冻保存中,PGCs在玻璃化冷冻液Ⅰ(10% DMSO+10% EG+20% FBS+10% PVP)条件下复苏后存活率最高(84.15%),且与其余5种玻璃化冷冻液下复苏后存活率之间差异均极显著(P＜0.01).③培养传至第3代的慢速冷冻复苏后PGCs细胞和培养传至第2代的玻璃化冷冻复苏后PGCs细胞,PAS染色、AKP染色呈阳性并保持完整的二倍体核型.
本研究對髮育至第19期的鷄胚性腺原始生殖細胞(primordial germ cells,PGCs)分離提純後,在DMEM中添加冷凍保護劑DMSO(二甲基亞砜)、EG(乙二醇)、蔗糖、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)分彆組成6種慢速冷凍保護液和6種玻璃化冷凍保護液,進行超低溫冷凍保存.複囌後苔盼藍染色測定細胞存活率,體外接種培養、傳代.結果:①慢速冷凍保存中,PGCs在慢速冷凍液V(10%EG+10% FBS+0.1 mol/L蔗糖)條件下複囌後存活率最高(92.20%),且與慢速冷凍液Ⅰ(10% DMSO+10% FBS)存活率之間差異顯著(P＜0.05).②玻璃化冷凍保存中,PGCs在玻璃化冷凍液Ⅰ(10% DMSO+10% EG+20% FBS+10% PVP)條件下複囌後存活率最高(84.15%),且與其餘5種玻璃化冷凍液下複囌後存活率之間差異均極顯著(P＜0.01).③培養傳至第3代的慢速冷凍複囌後PGCs細胞和培養傳至第2代的玻璃化冷凍複囌後PGCs細胞,PAS染色、AKP染色呈暘性併保持完整的二倍體覈型.
본연구대발육지제19기적계배성선원시생식세포(primordial germ cells,PGCs)분리제순후,재DMEM중첨가냉동보호제DMSO(이갑기아풍)、EG(을이순)、자당、PVP(취을희필각완동)분별조성6충만속냉동보호액화6충파리화냉동보호액,진행초저온냉동보존.복소후태반람염색측정세포존활솔,체외접충배양、전대.결과:①만속냉동보존중,PGCs재만속냉동액V(10%EG+10% FBS+0.1 mol/L자당)조건하복소후존활솔최고(92.20%),차여만속냉동액Ⅰ(10% DMSO+10% FBS)존활솔지간차이현저(P＜0.05).②파리화냉동보존중,PGCs재파리화냉동액Ⅰ(10% DMSO+10% EG+20% FBS+10% PVP)조건하복소후존활솔최고(84.15%),차여기여5충파리화냉동액하복소후존활솔지간차이균겁현저(P＜0.01).③배양전지제3대적만속냉동복소후PGCs세포화배양전지제2대적파리화냉동복소후PGCs세포,PAS염색、AKP염색정양성병보지완정적이배체핵형.
