CAJ | 학술논문

目的:制备鼠抗人CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)蛋白的单克隆抗体,探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,混合后免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为MC9和2C9,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域(CMTM7163-175),可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry, ICC).2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域(CMTM719-44),该单抗只能用于Western blot分析.初步的功能研究提示,CMTM7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体,为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.
목적:제비서항인CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)단백적단극륭항체,탐토CMTM7단백적분자결구화생물학공능.방법:통과생물신식학대CMTM7적단백서렬진행분석,선취료3단서렬합성다태병여약공척혈람소(keyhole limpet hemocyanin, KLH)우련,혼합후면역Balb/c소서.취면역소서적비세포화동계소서적골수류세포SP2/0진행상규융합,간접ELISA방법진행사선화유한희석극륭화,획득서항CMTM7단백단극륭항체적잡교류세포주,용Western blot、면역형광이급면역세포화학등방법대기특성진행감정.결과:성공지건립료2주은정분비항CMTM7단백적단극륭항체잡교류세포주,분별명명위MC9화2C9,기면역구단백아류균위IgG1.MC9단항식별적항원표위위우CMTM7안기산잔기163～175구역(CMTM7163-175),가용우Western blot、면역형광화면역세포화학분석(immunocytochemistry, ICC).2C9단항식별적항원표위위우CMTM7안기산잔기19～44구역(CMTM719-44),해단항지능용우Western blot분석.초보적공능연구제시,CMTM7단백재식물혈응소(phytohemagglutinin, PHA)활화조기적외주혈림파세포중표체상조.결론:획득료특이성호、능구식별불동항원표위이급불동용도적서항인CMTM7단백적단극륭항체,위연구CMTM7단백적분자결구이급공능특성전정료기출.