南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
8期
1382-1386,1390
,共6页
李莹%杨春莉%赵莹%郭瑜琪%刘昌政%周晓红
李瑩%楊春莉%趙瑩%郭瑜琪%劉昌政%週曉紅
리형%양춘리%조형%곽유기%류창정%주효홍
反向遗传学%肉毒神经毒素%克隆
反嚮遺傳學%肉毒神經毒素%剋隆
반향유전학%육독신경독소%극륭
目的 利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素(BoNT)基因型特异性靶片段质粒、菌株.方法 自GenBank获取BoNT基因序列,利用DNAMAN、Lasergene、VectorNTI等多种生物信息学分析软件和BLAST等网上数据分析平台进行综合分析,以锚定BoNT/B与BoNT/E基因中的型特异性靶片段,分别设计合成5条和10条DNA短链,经重叠PCR扩增获得完整的靶片段,纯化后连接到pMD 18-T载体上,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,质粒提取后进行酶切和测序鉴定.结果 分析了全球已报道的60条BoNT基因序列(A、B、E、F型),于BoNT/B与BoNT/E基因中,分别锚定了215 bp和360bp的靶片段,并设计合成其特异的检测引物对,经酶切、测序确证,成功合成具有型特异性的BoNT/B与BoNT/E靶片段.结论 获得含有型特异性BoNT/B与BoNT/E靶片段的重组质粒pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E及其菌株.
目的 利用反嚮遺傳學原理構建B、E型肉毒神經毒素(BoNT)基因型特異性靶片段質粒、菌株.方法 自GenBank穫取BoNT基因序列,利用DNAMAN、Lasergene、VectorNTI等多種生物信息學分析軟件和BLAST等網上數據分析平檯進行綜閤分析,以錨定BoNT/B與BoNT/E基因中的型特異性靶片段,分彆設計閤成5條和10條DNA短鏈,經重疊PCR擴增穫得完整的靶片段,純化後連接到pMD 18-T載體上,轉化至大腸桿菌DH5α感受態細胞中,質粒提取後進行酶切和測序鑒定.結果 分析瞭全毬已報道的60條BoNT基因序列(A、B、E、F型),于BoNT/B與BoNT/E基因中,分彆錨定瞭215 bp和360bp的靶片段,併設計閤成其特異的檢測引物對,經酶切、測序確證,成功閤成具有型特異性的BoNT/B與BoNT/E靶片段.結論 穫得含有型特異性BoNT/B與BoNT/E靶片段的重組質粒pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E及其菌株.
목적 이용반향유전학원리구건B、E형육독신경독소(BoNT)기인형특이성파편단질립、균주.방법 자GenBank획취BoNT기인서렬,이용DNAMAN、Lasergene、VectorNTI등다충생물신식학분석연건화BLAST등망상수거분석평태진행종합분석,이묘정BoNT/B여BoNT/E기인중적형특이성파편단,분별설계합성5조화10조DNA단련,경중첩PCR확증획득완정적파편단,순화후련접도pMD 18-T재체상,전화지대장간균DH5α감수태세포중,질립제취후진행매절화측서감정.결과 분석료전구이보도적60조BoNT기인서렬(A、B、E、F형),우BoNT/B여BoNT/E기인중,분별묘정료215 bp화360bp적파편단,병설계합성기특이적검측인물대,경매절、측서학증,성공합성구유형특이성적BoNT/B여BoNT/E파편단.결론 획득함유형특이성BoNT/B여BoNT/E파편단적중조질립pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E급기균주.
