广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2009年
3期
299-303
,共5页
陈武%莫炜%张艳玲%宋钢%宋后燕
陳武%莫煒%張豔玲%宋鋼%宋後燕
진무%막위%장염령%송강%송후연
毕赤酵母%kringle区%纤溶酶原%缺失突变体%纯化
畢赤酵母%kringle區%纖溶酶原%缺失突變體%純化
필적효모%kringle구%섬용매원%결실돌변체%순화
目的 研究人纤溶酶原 kringle 区缺失突变体(PLGΔK)的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达、产物纯化及理化性质鉴定.方法 采用7.5 L发酵罐对工程菌 PLGΔK/GS115 进行高密度培养、甲醇诱导表达,培液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥.等电聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测 PLGΔK 等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物S-2403 分别测定PLGΔK 激活后的纤维蛋白和酰胺水解活性.结果 7.5 L高密度发酵可获得约为400 mg/L培液的表达量,经三步纯化后制备的PLGΔK纯度大于96%.理化分析显示PLGΔK的等电点为7.5～7.8,分子量:27.787 kD,比活性:23.6 U/mg.结论 初步建立了PLGΔK的酵母高密度发酵及纯化工艺,所制备半成品活性与血浆提取的PLG相近,具备放大生产和应用的潜力.
目的 研究人纖溶酶原 kringle 區缺失突變體(PLGΔK)的畢赤酵母(Pichia pastoris)錶達、產物純化及理化性質鑒定.方法 採用7.5 L髮酵罐對工程菌 PLGΔK/GS115 進行高密度培養、甲醇誘導錶達,培液經離心、超濾、離子交換層析、凝膠濾過、透析後冷凍榦燥.等電聚焦電泳、HPLC、質譜分彆檢測 PLGΔK 等電點、純度和分子量;纖維蛋白平闆、肽底物S-2403 分彆測定PLGΔK 激活後的纖維蛋白和酰胺水解活性.結果 7.5 L高密度髮酵可穫得約為400 mg/L培液的錶達量,經三步純化後製備的PLGΔK純度大于96%.理化分析顯示PLGΔK的等電點為7.5～7.8,分子量:27.787 kD,比活性:23.6 U/mg.結論 初步建立瞭PLGΔK的酵母高密度髮酵及純化工藝,所製備半成品活性與血漿提取的PLG相近,具備放大生產和應用的潛力.
목적 연구인섬용매원 kringle 구결실돌변체(PLGΔK)적필적효모(Pichia pastoris)표체、산물순화급이화성질감정.방법 채용7.5 L발효관대공정균 PLGΔK/GS115 진행고밀도배양、갑순유도표체,배액경리심、초려、리자교환층석、응효려과、투석후냉동간조.등전취초전영、HPLC、질보분별검측 PLGΔK 등전점、순도화분자량;섬유단백평판、태저물S-2403 분별측정PLGΔK 격활후적섬유단백화선알수해활성.결과 7.5 L고밀도발효가획득약위400 mg/L배액적표체량,경삼보순화후제비적PLGΔK순도대우96%.이화분석현시PLGΔK적등전점위7.5～7.8,분자량:27.787 kD,비활성:23.6 U/mg.결론 초보건립료PLGΔK적효모고밀도발효급순화공예,소제비반성품활성여혈장제취적PLG상근,구비방대생산화응용적잠력.
