CAJ | 학술논문

背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在多种肿瘤细胞表面异常表达.力达霉素是从链霉菌中分离得到的具有强抗肿瘤作用的烯二炔类抗生素.本研究的目的是制备一种特异性靶向EGFR的寡肽配体与力达霉素的强化融合蛋白(Ec-LDP-AE),并初步探讨其抗肿瘤活性.方法:制备融合蛋白(Ec-LDP),并分离纯化,用高效液相色谱法检测Ec-LDP的纯度,ELISA、流式细胞技术以及细胞免疫荧光方法分析纯化的Ec-LDP蛋白对不同肿瘤细胞的免疫结合活性.将纯化的Ec-LDP蛋白与力达霉素发色团进行组装,构建Ec-LDP-AE,用高效液相色谱法检测350 nm处的吸收峰,MTT法检测Ec-LDP-AE的体外抗肿瘤活性.结果:成功构建并表达了Ec-LDP蛋白,目的蛋白分泌至大肠杆菌周质腔中,产量为每升发酵液18 mg活性蛋白,其纯度为95.3%.ELISA和细胞流式检测结果均显示Ec-LDP蛋白对EGFR高表达的肿瘤细胞系A431和MCF-7都有很强的免疫结合活性,而对不表达EGFR的NIH 3T3细胞则无结合活性.免疫荧光实验也证实Ec-LDP蛋白可与A431细胞膜受体结合.Ec-LDP-AE蛋白在350 nm波长处出现特定吸收峰,表明其构建成功.MTT法检测结果显示Ec-LDP-AE对体外培养的肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,对MCF-7和A431细胞的IC50值分别为3.06×10-11 mol/L和9.38×10-13 mol/L.结论:本研究制备的强化融合蛋白Ec-LDP-AE对表皮生长因子受体有靶向作用,并且保留了力达霉素的强烈细胞毒作用.
배경여목적:표피생장인자수체(epidermal growth factor receptor,EGFR)재다충종류세포표면이상표체.력체매소시종련매균중분리득도적구유강항종류작용적희이결류항생소.본연구적목적시제비일충특이성파향EGFR적과태배체여력체매소적강화융합단백(Ec-LDP-AE),병초보탐토기항종류활성.방법:제비융합단백(Ec-LDP),병분리순화,용고효액상색보법검측Ec-LDP적순도,ELISA、류식세포기술이급세포면역형광방법분석순화적Ec-LDP단백대불동종류세포적면역결합활성.장순화적Ec-LDP단백여력체매소발색단진행조장,구건Ec-LDP-AE,용고효액상색보법검측350 nm처적흡수봉,MTT법검측Ec-LDP-AE적체외항종류활성.결과:성공구건병표체료Ec-LDP단백,목적단백분비지대장간균주질강중,산량위매승발효액18 mg활성단백,기순도위95.3%.ELISA화세포류식검측결과균현시Ec-LDP단백대EGFR고표체적종류세포계A431화MCF-7도유흔강적면역결합활성,이대불표체EGFR적NIH 3T3세포칙무결합활성.면역형광실험야증실Ec-LDP단백가여A431세포막수체결합.Ec-LDP-AE단백재350 nm파장처출현특정흡수봉,표명기구건성공.MTT법검측결과현시Ec-LDP-AE대체외배양적종류세포유강렬적살상작용,대MCF-7화A431세포적IC50치분별위3.06×10-11 mol/L화9.38×10-13 mol/L.결론:본연구제비적강화융합단백Ec-LDP-AE대표피생장인자수체유파향작용,병차보류료력체매소적강렬세포독작용.