中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
6期
64-67
,共4页
于永生%王晓阳%朴庆林%罗晓彤%金海国
于永生%王曉暘%樸慶林%囉曉彤%金海國
우영생%왕효양%박경림%라효동%금해국
辽宁绒山羊%毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因%毛囊特异性表达载体%转基因体细胞
遼寧絨山羊%毛角蛋白Ⅱ型中間絲基因%毛囊特異性錶達載體%轉基因體細胞
료녕융산양%모각단백Ⅱ형중간사기인%모낭특이성표체재체%전기인체세포
本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆.通过PCR扩增得到的KAP6-1基凶启动子,然后与RT-PCR扩增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,将重组表达载体以脂质体介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因细胞克隆,结果显示,外源KAP6-1启动子序列和KIFⅡ-9 cDNA整合到细胞基因组中,为下一步通过核移植方法获得转基凶绒山羊提供了条件.
本試驗旨在構建綿羊毛角蛋白Ⅱ型中間絲9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特異性錶達載體,轉染遼寧絨山羊胎兒成纖維細胞,篩選齣穩定錶達外源基因併可用于覈移植的轉基因細胞剋隆.通過PCR擴增得到的KAP6-1基兇啟動子,然後與RT-PCR擴增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列連接構成皮膚特異性錶達載體pcDNA3.1-KK,將重組錶達載體以脂質體介導轉染胎兒成纖維細胞,通過G418篩選穫得轉基因細胞剋隆,結果顯示,外源KAP6-1啟動子序列和KIFⅡ-9 cDNA整閤到細胞基因組中,為下一步通過覈移植方法穫得轉基兇絨山羊提供瞭條件.
본시험지재구건면양모각단백Ⅱ형중간사9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)기인cDNA적모낭특이성표체재체,전염료녕융산양태인성섬유세포,사선출은정표체외원기인병가용우핵이식적전기인세포극륭.통과PCR확증득도적KAP6-1기흉계동자,연후여RT-PCR확증득도적KIFⅡ-9 cDNA서렬련접구성피부특이성표체재체pcDNA3.1-KK,장중조표체재체이지질체개도전염태인성섬유세포,통과G418사선획득전기인세포극륭,결과현시,외원KAP6-1계동자서렬화KIFⅡ-9 cDNA정합도세포기인조중,위하일보통과핵이식방법획득전기흉융산양제공료조건.
