CAJ | 학술논문

目的研究不同民族慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV前S2/S(preS2/S)和C(core, C)基因在大肠杆菌Escherichia coli (E.coli)中表达的稳定性和水平,并对其抗原性进行鉴定,为创制新型疫苗提供抗原材料.方法从中国云南少数民族地区50例慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV基因组DNA,将聚合酶链反应(PCR)扩增-克隆-测序的HBV preS2/S和C基因插入到表达载体pλPR上,构建重组pλPR-S2S和pλPR-C表达质粒,并在大肠杆菌TOP10中表达.用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定表达产物非融合蛋白,并对其抗原性用Western印迹和ELISA方法进行检测.结果 SDS-PAGE检测到全部慢性乙型肝炎患者pλPR-S2S和pλPR-C重组质粒在大肠杆菌TOP10中存在稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白相对分子质量分别为31 000和21 000,非融合蛋白浓度约占16%,纯度达96%.Western印迹和ELISA分析,非融合蛋白能分别与HBV preS2/S抗原单抗、C抗原单抗及慢性乙型肝炎患者血清发生反应,而与对照的甲型肝炎(HAV)患者血清、丙型肝炎(HCV)患者血清及正常血清之间无交叉反应.结论中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者HBV preS2/S和C基因在大肠杆菌TOP10中有稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白具有抗原性.这些发现为创制新型疫苗具有潜在应用价值.
목적연구불동민족만성을형간염(CHB)환자HBV전S2/S(preS2/S)화C(core, C)기인재대장간균Escherichia coli (E.coli)중표체적은정성화수평,병대기항원성진행감정,위창제신형역묘제공항원재료.방법종중국운남소수민족지구50례만성을형간염환자혈청중제취HBV기인조DNA,장취합매련반응(PCR)확증-극륭-측서적HBV preS2/S화C기인삽입도표체재체pλPR상,구건중조pλPR-S2S화pλPR-C표체질립,병재대장간균TOP10중표체.용십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)측정표체산물비융합단백,병대기항원성용Western인적화ELISA방법진행검측.결과 SDS-PAGE검측도전부만성을형간염환자pλPR-S2S화pλPR-C중조질립재대장간균TOP10중존재은정성화고수평적표체,표체적비융합단백상대분자질량분별위31 000화21 000,비융합단백농도약점16%,순도체96%.Western인적화ELISA분석,비융합단백능분별여HBV preS2/S항원단항、C항원단항급만성을형간염환자혈청발생반응,이여대조적갑형간염(HAV)환자혈청、병형간염(HCV)환자혈청급정상혈청지간무교차반응.결론중국운남소수민족지구만성을형간염환자HBV preS2/S화C기인재대장간균TOP10중유은정성화고수평적표체,표체적비융합단백구유항원성.저사발현위창제신형역묘구유잠재응용개치.