CAJ | 학술논문

目的研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染对缺氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21、p27在细胞增殖过程中的调控作用.方法经脂质体介导将iNOS重组逆转录病毒载体(pLNCX/iNOS)转染大鼠PASMCs,检测外源性iNOS表达及其生物学活性;氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入、流式细胞技术观察iNOS转染对缺氧条件下大鼠PASMCs增殖的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞技术检测p21、p27的变化.结果转染后检测证实,外源性iNOS基因可有效转录、表达,具有生物学活性;iNOS转染显著抑制缺氧条件下大鼠PASMCs3H-TdR的掺入,缺氧组(D组)大鼠每分钟衰变数值为(18 011±2 521)次/min,缺氧+DETA NONOate组(E组,0.5、1 mmol/L)每分钟衰变数值分别为(15 364±1 382)次/min、(13 712±1 782)次/min、低氧+iNOS转染组(G组)大鼠每分钟衰变数值为(15 145±1 514)次/min,3组比较差异有显著性(P＜0.01);iNOS转染导致停滞于G0/G1期的细胞比例增加,G组G0/G1期细胞百分比为67.8%,与D组(46.8%)比较差异也有显著性(P＜0.01);iNOS转染可使低氧条件下PASMCs的P27蛋白表达下调受到抑制,P27蛋白质表达相对百分比结果表明,静息组(A组)为25.1%,常氧组(B组)为15.8%,E1组(0.5 mmol/L)、E2组(1 mmol/L)分别为11.6%、14.3%,G组为12.7%,D组、E1组(0.1mmol/L)组及C组P27蛋白表达未能检测到.结论iNOS基因转染可抑制缺氧条件下大鼠PASMCs的增殖,其机制可能与NO通过转录后机制抑制P27蛋白表达下调有关.
목적연구유도형일양화담합매(iNOS)기인전염대결양조건하대서폐동맥평활기세포(PASMCs)증식적영향,탐토세포주기단백의뢰성격매억제인자p21、p27재세포증식과정중적조공작용.방법경지질체개도장iNOS중조역전록병독재체(pLNCX/iNOS)전염대서PASMCs,검측외원성iNOS표체급기생물학활성;천표기흉선밀정탈양핵감(3H-TdR)참입、류식세포기술관찰iNOS전염대결양조건하대서PASMCs증식적영향;역전록-취합매련반응(RT-PCR)화류식세포기술검측p21、p27적변화.결과전염후검측증실,외원성iNOS기인가유효전록、표체,구유생물학활성;iNOS전염현저억제결양조건하대서PASMCs3H-TdR적참입,결양조(D조)대서매분종쇠변수치위(18 011±2 521)차/min,결양+DETA NONOate조(E조,0.5、1 mmol/L)매분종쇠변수치분별위(15 364±1 382)차/min、(13 712±1 782)차/min、저양+iNOS전염조(G조)대서매분종쇠변수치위(15 145±1 514)차/min,3조비교차이유현저성(P＜0.01);iNOS전염도치정체우G0/G1기적세포비례증가,G조G0/G1기세포백분비위67.8%,여D조(46.8%)비교차이야유현저성(P＜0.01);iNOS전염가사저양조건하PASMCs적P27단백표체하조수도억제,P27단백질표체상대백분비결과표명,정식조(A조)위25.1%,상양조(B조)위15.8%,E1조(0.5 mmol/L)、E2조(1 mmol/L)분별위11.6%、14.3%,G조위12.7%,D조、E1조(0.1mmol/L)조급C조P27단백표체미능검측도.결론iNOS기인전염가억제결양조건하대서PASMCs적증식,기궤제가능여NO통과전록후궤제억제P27단백표체하조유관.