CAJ | 학술논문

目的观察丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)体外长期存活状态下是否仍有丙型肝炎病毒(HCV)存在及其不同时期高变区基因序列的变化.方法用EB病毒感染并使HCV阳性PBMC转化,获得HCV的外周血永生化B细胞(LCL).而后,每个月应用逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-net-PCR)检测1次培养细胞和上清液中的HCV RNA,并用原位RT-net-PCR观察HCVRNA在细胞中存在的部位;应用基因测序技术分析LCL传代培养1个月和9个月后HCV高变区(HVR)核苷酸序列,并以原患者半年后血清作对照.结果经连续1年检测,HCV在传代细胞中持续存在,培养细胞中的HCV RNA负链和培养上清液中的HCV呈间断阳性;原位PCR发现HCVRNA阳性信号弥散性、簇状和团块状分布于胞浆中,细胞膜、核膜和细胞核阴性;患者血清HCV核苷酸变异集中在第1491～1583位核苷酸(即384～414位氨基酸)和第1761～1781位核苷酸(即473～479位氨基酸)两个区域,而LCL传代培养1个月和9个月后细胞中HCV HVR核苷酸同源性为99.37%.结论HCV可以在LCL中较长时间存在,而HVR基因序列无明显变化.
목적관찰병형간염환자외주혈단개핵세포(PBMC)체외장기존활상태하시부잉유병형간염병독(HCV)존재급기불동시기고변구기인서렬적변화.방법용EB병독감염병사HCV양성PBMC전화,획득HCV적외주혈영생화B세포(LCL).이후,매개월응용역전록-투식-취합매련반응(RT-net-PCR)검측1차배양세포화상청액중적HCV RNA,병용원위RT-net-PCR관찰HCVRNA재세포중존재적부위;응용기인측서기술분석LCL전대배양1개월화9개월후HCV고변구(HVR)핵감산서렬,병이원환자반년후혈청작대조.결과경련속1년검측,HCV재전대세포중지속존재,배양세포중적HCV RNA부련화배양상청액중적HCV정간단양성;원위PCR발현HCVRNA양성신호미산성、족상화단괴상분포우포장중,세포막、핵막화세포핵음성;환자혈청HCV핵감산변이집중재제1491～1583위핵감산(즉384～414위안기산)화제1761～1781위핵감산(즉473～479위안기산)량개구역,이LCL전대배양1개월화9개월후세포중HCV HVR핵감산동원성위99.37%.결론HCV가이재LCL중교장시간존재,이HVR기인서렬무명현변화.