中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2012年
4期
313-318
,共6页
马怡晖%张强%谷雨妹%卢朝辉%陈杰
馬怡暉%張彊%穀雨妹%盧朝輝%陳傑
마이휘%장강%곡우매%로조휘%진걸
泛素%蛋白酶体%泛素连接酶%Ras癌蛋白
汎素%蛋白酶體%汎素連接酶%Ras癌蛋白
범소%단백매체%범소련접매%Ras암단백
目的 应用蛋白质敲减技术原理,构建理论上能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合型泛素连接酶E3的真核表达载体.方法 选取Raf-1、PI3K、RalGDS中能够与Ras蛋白相互作用的结合结构域和具有泛素连接酶活性的F-Box及U-Box作为功能结构域,采用分子克隆技术依次将其连入pcDNA3.1中构建融合蛋白表达载体,双酶切、PCR和测序技术检测连入核苷酸片段的正确性,Western blot检测融合蛋白表达载体在真核细胞内表达的正确性和作用有效性.结果 成功获得6个融合蛋白E3表达载体,5个能够在真核细胞内有效表达,其中(RBD+ CRD) Raf-1 -U-Box-pcDNA3.1能够敲减人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中Ras蛋白.结论 成功构建能够靶向敲减Ras癌蛋白的融合蛋白表达载体,为下一步应用蛋白质敲减技术奠定了实验基础.
目的 應用蛋白質敲減技術原理,構建理論上能夠靶嚮敲減Ras癌蛋白的融閤型汎素連接酶E3的真覈錶達載體.方法 選取Raf-1、PI3K、RalGDS中能夠與Ras蛋白相互作用的結閤結構域和具有汎素連接酶活性的F-Box及U-Box作為功能結構域,採用分子剋隆技術依次將其連入pcDNA3.1中構建融閤蛋白錶達載體,雙酶切、PCR和測序技術檢測連入覈苷痠片段的正確性,Western blot檢測融閤蛋白錶達載體在真覈細胞內錶達的正確性和作用有效性.結果 成功穫得6箇融閤蛋白E3錶達載體,5箇能夠在真覈細胞內有效錶達,其中(RBD+ CRD) Raf-1 -U-Box-pcDNA3.1能夠敲減人胰腺癌細胞繫PANC-1細胞中Ras蛋白.結論 成功構建能夠靶嚮敲減Ras癌蛋白的融閤蛋白錶達載體,為下一步應用蛋白質敲減技術奠定瞭實驗基礎.
목적 응용단백질고감기술원리,구건이론상능구파향고감Ras암단백적융합형범소련접매E3적진핵표체재체.방법 선취Raf-1、PI3K、RalGDS중능구여Ras단백상호작용적결합결구역화구유범소련접매활성적F-Box급U-Box작위공능결구역,채용분자극륭기술의차장기련입pcDNA3.1중구건융합단백표체재체,쌍매절、PCR화측서기술검측련입핵감산편단적정학성,Western blot검측융합단백표체재체재진핵세포내표체적정학성화작용유효성.결과 성공획득6개융합단백E3표체재체,5개능구재진핵세포내유효표체,기중(RBD+ CRD) Raf-1 -U-Box-pcDNA3.1능구고감인이선암세포계PANC-1세포중Ras단백.결론 성공구건능구파향고감Ras암단백적융합단백표체재체,위하일보응용단백질고감기술전정료실험기출.
