中国食品学报
中國食品學報
중국식품학보
JOURNAL OF CHINESE INSTITUTE OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2012年
2期
41-45
,共5页
胡元森%蒋炳伸%潘涛%李翠香
鬍元森%蔣炳伸%潘濤%李翠香
호원삼%장병신%반도%리취향
酸性α-淀粉酶%基因克隆%原核表达
痠性α-澱粉酶%基因剋隆%原覈錶達
산성α-정분매%기인극륭%원핵표체
为使枯草芽胞杆菌XM-1菌株酸性α-淀粉酶基因高通量表达,提高酶产量,利用PCR方法从基因组DNA中扩增出该酶基因As-Amy,并构建pET30a (+)/As-Amy原核表达栽体,在大肠杆菌BL21中成功表达.测序结果表明As-Amy基因编码框全长为1 434bp(Genbank登录号GQ153530),编码477个氨基酸,预测蛋白质分子质量为61 ku.序列比对分析表明,As-Amy与多个枯草芽胞杆菌α-淀粉酶基因相似性在98％以上,所编码氨基酸与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis natto)IAM1212同源性最高.SDS-PAGE分析显示,As-Amy基因在大肠杆菌BL21中获得表达,酶活力较原菌株XM-1提高了2.7倍,表达蛋白分子质量大小与预测值相符.
為使枯草芽胞桿菌XM-1菌株痠性α-澱粉酶基因高通量錶達,提高酶產量,利用PCR方法從基因組DNA中擴增齣該酶基因As-Amy,併構建pET30a (+)/As-Amy原覈錶達栽體,在大腸桿菌BL21中成功錶達.測序結果錶明As-Amy基因編碼框全長為1 434bp(Genbank登錄號GQ153530),編碼477箇氨基痠,預測蛋白質分子質量為61 ku.序列比對分析錶明,As-Amy與多箇枯草芽胞桿菌α-澱粉酶基因相似性在98％以上,所編碼氨基痠與枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis natto)IAM1212同源性最高.SDS-PAGE分析顯示,As-Amy基因在大腸桿菌BL21中穫得錶達,酶活力較原菌株XM-1提高瞭2.7倍,錶達蛋白分子質量大小與預測值相符.
위사고초아포간균XM-1균주산성α-정분매기인고통량표체,제고매산량,이용PCR방법종기인조DNA중확증출해매기인As-Amy,병구건pET30a (+)/As-Amy원핵표체재체,재대장간균BL21중성공표체.측서결과표명As-Amy기인편마광전장위1 434bp(Genbank등록호GQ153530),편마477개안기산,예측단백질분자질량위61 ku.서렬비대분석표명,As-Amy여다개고초아포간균α-정분매기인상사성재98％이상,소편마안기산여고초아포간균(Bacillus subtilis natto)IAM1212동원성최고.SDS-PAGE분석현시,As-Amy기인재대장간균BL21중획득표체,매활력교원균주XM-1제고료2.7배,표체단백분자질량대소여예측치상부.
