畜牧与饲料科学
畜牧與飼料科學
축목여사료과학
ANIMAL HUSBANDRY AND FEED SCIENCE
2010年
6期
467-469
,共3页
瘤胃甲烷菌%实时荧光定量PCR%标准品质粒%标准曲线
瘤胃甲烷菌%實時熒光定量PCR%標準品質粒%標準麯線
류위갑완균%실시형광정량PCR%표준품질립%표준곡선
试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒.根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线.结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物.
試驗構建瞭瘤胃總甲烷菌實時熒光絕對定量PCR的標準品及標準麯線用于總甲烷菌的定量測定,併提取瘤胃微生物總DNA,以甲烷菌特異性引物進行PCR擴增,迴收純化PCR產物,與pBS-T載體連接併轉化到大腸桿菌,再用氨芐西林培養基篩選暘性重組質粒,提取含目的片段質粒DNA,通過PCR及測序鑒定重組質粒.根據OD值確定濃度,將梯度稀釋的質粒作為模闆,進行熒光定量PCR反應併作齣標準麯線.結果錶明:所構建的標準麯線具有很高的相關性(R2=0.992),併穫得瞭高擴增效率產物.
시험구건료류위총갑완균실시형광절대정량PCR적표준품급표준곡선용우총갑완균적정량측정,병제취류위미생물총DNA,이갑완균특이성인물진행PCR확증,회수순화PCR산물,여pBS-T재체련접병전화도대장간균,재용안변서림배양기사선양성중조질립,제취함목적편단질립DNA,통과PCR급측서감정중조질립.근거OD치학정농도,장제도희석적질립작위모판,진행형광정량PCR반응병작출표준곡선.결과표명:소구건적표준곡선구유흔고적상관성(R2=0.992),병획득료고확증효솔산물.
