中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
11期
1002-1005
,共4页
邓艳琴%王加熊%肖方震%何似%王灵岚%严延生
鄧豔琴%王加熊%肖方震%何似%王靈嵐%嚴延生
산염금%왕가웅%초방진%하사%왕령람%엄연생
结核分枝杆菌%Rv0577%毕赤酵母%基因表达%抗原性
結覈分枝桿菌%Rv0577%畢赤酵母%基因錶達%抗原性
결핵분지간균%Rv0577%필적효모%기인표체%항원성
目的 在毕赤酵母表达结核分枝杆菌Rv0577基因并鉴定重组蛋白抗原活性.方法 从结核分枝杆菌标准株H37Rv扩增Rv0577基因,TA克隆进入pGEM(R)-T Easy载体,再亚克隆进入pPICZαA.重组质粒pPICZαA-Rv0577经双酶切鉴定并测序证实,线性化后电转化导入毕赤酵母X 33表达;采用Western blot 和Dot blot鉴定抗原活性.结果 双酶切及测序鉴定均证实获得Rv0577基因的正确克隆.pPICZαA-Rv0577在X 33分泌表达的目的 蛋白,通过硫酸铵沉淀、HPLC顺序纯化,获得的纯化蛋白与结核病患者血清进行Dot blot,7份中有3份反应阳性.结论 Rv0577基因在毕赤酵母获得高效表达,重组抗原可被结核病患者血清识别,具有抗原活性.
目的 在畢赤酵母錶達結覈分枝桿菌Rv0577基因併鑒定重組蛋白抗原活性.方法 從結覈分枝桿菌標準株H37Rv擴增Rv0577基因,TA剋隆進入pGEM(R)-T Easy載體,再亞剋隆進入pPICZαA.重組質粒pPICZαA-Rv0577經雙酶切鑒定併測序證實,線性化後電轉化導入畢赤酵母X 33錶達;採用Western blot 和Dot blot鑒定抗原活性.結果 雙酶切及測序鑒定均證實穫得Rv0577基因的正確剋隆.pPICZαA-Rv0577在X 33分泌錶達的目的 蛋白,通過硫痠銨沉澱、HPLC順序純化,穫得的純化蛋白與結覈病患者血清進行Dot blot,7份中有3份反應暘性.結論 Rv0577基因在畢赤酵母穫得高效錶達,重組抗原可被結覈病患者血清識彆,具有抗原活性.
목적 재필적효모표체결핵분지간균Rv0577기인병감정중조단백항원활성.방법 종결핵분지간균표준주H37Rv확증Rv0577기인,TA극륭진입pGEM(R)-T Easy재체,재아극륭진입pPICZαA.중조질립pPICZαA-Rv0577경쌍매절감정병측서증실,선성화후전전화도입필적효모X 33표체;채용Western blot 화Dot blot감정항원활성.결과 쌍매절급측서감정균증실획득Rv0577기인적정학극륭.pPICZαA-Rv0577재X 33분비표체적목적 단백,통과류산안침정、HPLC순서순화,획득적순화단백여결핵병환자혈청진행Dot blot,7빈중유3빈반응양성.결론 Rv0577기인재필적효모획득고효표체,중조항원가피결핵병환자혈청식별,구유항원활성.
