畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
11期
1612-1615
,共4页
张舒婕%龚炎长%俸艳萍%李世军%杨庆磊%胡福利%杨桓%彭秀丽
張舒婕%龔炎長%俸豔萍%李世軍%楊慶磊%鬍福利%楊桓%彭秀麗
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鸭%MHCⅡβ基因%克隆%原核表达%多克隆抗体
鴨%MHCⅡβ基因%剋隆%原覈錶達%多剋隆抗體
압%MHCⅡβ기인%극륭%원핵표체%다극륭항체
据NCBI上已发表的序列设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到MHCⅡβ基因,将其克隆至pMD18-T载体上,经酶切分析及测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌BL21中诱导表达.蛋白纯化后,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,经1∶100倍稀释后用于Western blot 分析.结果表明:克隆得到了鸭MHCⅡβ链基因,大小为798 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为92%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度达95%.制备的鼠抗鸭MHCⅡβ多克隆抗体,经酶联免疫吸附实验(ELISA)与免疫印迹法(Western blot)证实抗体的效价高、特异性强,为深入研究鸭MHCⅡ奠定了基础.
據NCBI上已髮錶的序列設計引物,通過RT-PCR從北京鴨脾髒的總RNA中擴增得到MHCⅡβ基因,將其剋隆至pMD18-T載體上,經酶切分析及測序鑒定後,進一步亞剋隆至原覈錶達載體pGEX-KG中,轉化大腸桿菌BL21中誘導錶達.蛋白純化後,免疫昆明小鼠製備多剋隆抗體,經1∶100倍稀釋後用于Western blot 分析.結果錶明:剋隆得到瞭鴨MHCⅡβ鏈基因,大小為798 bp,經覈苷痠測序與已登錄的基因序列同源性為92%;成功構建瞭原覈錶達載體,融閤蛋白得到瞭高效錶達且純化後純度達95%.製備的鼠抗鴨MHCⅡβ多剋隆抗體,經酶聯免疫吸附實驗(ELISA)與免疫印跡法(Western blot)證實抗體的效價高、特異性彊,為深入研究鴨MHCⅡ奠定瞭基礎.
거NCBI상이발표적서렬설계인물,통과RT-PCR종북경압비장적총RNA중확증득도MHCⅡβ기인,장기극륭지pMD18-T재체상,경매절분석급측서감정후,진일보아극륭지원핵표체재체pGEX-KG중,전화대장간균BL21중유도표체.단백순화후,면역곤명소서제비다극륭항체,경1∶100배희석후용우Western blot 분석.결과표명:극륭득도료압MHCⅡβ련기인,대소위798 bp,경핵감산측서여이등록적기인서렬동원성위92%;성공구건료원핵표체재체,융합단백득도료고효표체차순화후순도체95%.제비적서항압MHCⅡβ다극륭항체,경매련면역흡부실험(ELISA)여면역인적법(Western blot)증실항체적효개고、특이성강,위심입연구압MHCⅡ전정료기출.
