CAJ | 학술논문

目的探讨内毒素致肝细胞凋亡和内毒素血症在重症肝炎发病中的作用机制.方法培养L02肝细胞并进行传代,采用内毒素10 mg/ml分别在4小时、8小时、16小时和24小时进行刺激,并将其分为4小时、8小时、16小时和24小时组和对照组5组,采用流式细胞术和荧光染色检测肝细胞凋亡以及免疫组化法检测Smac和Caspase9的表达.结果内毒素直接作用的L02细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体,应用Hcechst对内毒素刺激的L02细胞进行染色并在荧光显微镜下观察,Hcechst染色显示凋亡细胞呈蓝色荧光.流式细胞仪分析内毒素刺激4小时、8小时、16小时和24小时后晚期凋亡率分别为2.3%、4.0%、6.2%和18.2%,呈进行性增高(P<0.01),与对照组晚期凋亡率(0.3%)比较有显著性差异(P<0.05),Smac和Caspase9蛋白随着刺激时间的增长表达率逐渐增高(P<0.01),与对照组比较,各刺激组Smac和Caspase9蛋白表达显著增高(P<0.05).各组Smac与Caspase9蛋白表达呈正相关关系(r=0.527,P<0.001).且Smac和Caspase9蛋白在胞浆中呈棕黄色表达.结论内毒素在体外可以通过促凋亡蛋白Smac及增强下游通路Caspase9的活性直接诱导正常肝细胞凋亡.
목적 탐토내독소치간세포조망화내독소혈증재중증간염발병중적작용궤제.방법 배양L02간세포병진행전대,채용내독소10 mg/ml분별재4소시、8소시、16소시화24소시진행자격,병장기분위4소시、8소시、16소시화24소시조화대조조5조,채용류식세포술화형광염색검측간세포조망이급면역조화법검측Smac화Caspase9적표체.결과 내독소직접작용적L02세포재형태학상표현출포장농축핵응취성단괴、형성조망소체,응용Hcechst대내독소자격적L02세포진행염색병재형광현미경하관찰,Hcechst염색현시조망세포정람색형광.류식세포의분석내독소자격4소시、8소시、16소시화24소시후만기조망솔분별위2.3%、4.0%、6.2%화18.2%,정진행성증고(P<0.01),여대조조만기조망솔(0.3%)비교유현저성차이(P<0.05),Smac화Caspase9단백수착자격시간적증장표체솔축점증고(P<0.01),여대조조비교,각자격조Smac화Caspase9단백표체현저증고(P<0.05).각조Smac여Caspase9단백표체정정상관관계(r=0.527,P<0.001).차Smac화Caspase9단백재포장중정종황색표체.결론 내독소재체외가이통과촉조망단백Smac급증강하유통로Caspase9적활성직접유도정상간세포조망.