温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2008年
2期
100-105
,共6页
马泳泳%陈方平%杜建伟%陈焱%彭建强%吴小兵%解勤之
馬泳泳%陳方平%杜建偉%陳焱%彭建彊%吳小兵%解勤之
마영영%진방평%두건위%진염%팽건강%오소병%해근지
血友病B%基因治疗法%重组腺相关病毒%人凝血因子IX基因:结肠上皮细胞
血友病B%基因治療法%重組腺相關病毒%人凝血因子IX基因:結腸上皮細胞
혈우병B%기인치요법%중조선상관병독%인응혈인자IX기인:결장상피세포
目的:探讨重组腺相关病毒/人凝血因子Ix基因(rAAV-2/hFIX)在人/鼠结肠癌上皮细胞(SW480/C26细胞株)中的表达.方法:重组腺相关病毒/绿色荧光蛋白(rhhV-2/GFP)感染SW480/C26细胞,在荧光显微镜下观察GFP的表达,计算转染率.rAAV-2/hHX感染SW480/C26细胞,检测hFIX基因、FIXAg量及hFIX活性的表达.结果:SW480细胞株/C26细胞株GFP48hr阳性率分别为(57.0±8.5) %和(48.0土5.7)%;转导组14 d和21 d均可见外源hFIX的cDNA片断.SW480细胞转导了rAAV-2/hFIX后在第2天和第2l天ELISA法测hFIX抗原量分别为(98.0士4.3)和(30.9±6.5)ng·106cell-1·24h-1.未转导组为(2.7±0.1)ng·106cell-1·24h-1.C26细胞转导了rhAV-2/hFIX后在第2天测hFIX抗原量为(78土5.12)ng·106cell-1·24h-1.未转导组为(2.9士0.1)ng·108cell-1·24h-1.hFIX活性与hFIX抗原浓度明显相关.较对照组亦显著增高.结论:rAAV.2/GFP能有效地转导SW480/C26细胞.rhAV-2/hFIX能有效地转导SW480/C26细胞并表达具有凝血活性的功能蛋白hFIX.
目的:探討重組腺相關病毒/人凝血因子Ix基因(rAAV-2/hFIX)在人/鼠結腸癌上皮細胞(SW480/C26細胞株)中的錶達.方法:重組腺相關病毒/綠色熒光蛋白(rhhV-2/GFP)感染SW480/C26細胞,在熒光顯微鏡下觀察GFP的錶達,計算轉染率.rAAV-2/hHX感染SW480/C26細胞,檢測hFIX基因、FIXAg量及hFIX活性的錶達.結果:SW480細胞株/C26細胞株GFP48hr暘性率分彆為(57.0±8.5) %和(48.0土5.7)%;轉導組14 d和21 d均可見外源hFIX的cDNA片斷.SW480細胞轉導瞭rAAV-2/hFIX後在第2天和第2l天ELISA法測hFIX抗原量分彆為(98.0士4.3)和(30.9±6.5)ng·106cell-1·24h-1.未轉導組為(2.7±0.1)ng·106cell-1·24h-1.C26細胞轉導瞭rhAV-2/hFIX後在第2天測hFIX抗原量為(78土5.12)ng·106cell-1·24h-1.未轉導組為(2.9士0.1)ng·108cell-1·24h-1.hFIX活性與hFIX抗原濃度明顯相關.較對照組亦顯著增高.結論:rAAV.2/GFP能有效地轉導SW480/C26細胞.rhAV-2/hFIX能有效地轉導SW480/C26細胞併錶達具有凝血活性的功能蛋白hFIX.
목적:탐토중조선상관병독/인응혈인자Ix기인(rAAV-2/hFIX)재인/서결장암상피세포(SW480/C26세포주)중적표체.방법:중조선상관병독/록색형광단백(rhhV-2/GFP)감염SW480/C26세포,재형광현미경하관찰GFP적표체,계산전염솔.rAAV-2/hHX감염SW480/C26세포,검측hFIX기인、FIXAg량급hFIX활성적표체.결과:SW480세포주/C26세포주GFP48hr양성솔분별위(57.0±8.5) %화(48.0토5.7)%;전도조14 d화21 d균가견외원hFIX적cDNA편단.SW480세포전도료rAAV-2/hFIX후재제2천화제2l천ELISA법측hFIX항원량분별위(98.0사4.3)화(30.9±6.5)ng·106cell-1·24h-1.미전도조위(2.7±0.1)ng·106cell-1·24h-1.C26세포전도료rhAV-2/hFIX후재제2천측hFIX항원량위(78토5.12)ng·106cell-1·24h-1.미전도조위(2.9사0.1)ng·108cell-1·24h-1.hFIX활성여hFIX항원농도명현상관.교대조조역현저증고.결론:rAAV.2/GFP능유효지전도SW480/C26세포.rhAV-2/hFIX능유효지전도SW480/C26세포병표체구유응혈활성적공능단백hFIX.
