中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
3期
84-88
,共5页
杨松海%林天歆%刘珊英%范新兰%苏芳%潘秋辉
楊鬆海%林天歆%劉珊英%範新蘭%囌芳%潘鞦輝
양송해%림천흠%류산영%범신란%소방%반추휘
Osx%成骨细胞%分化%增殖%腺病毒
Osx%成骨細胞%分化%增殖%腺病毒
Osx%성골세포%분화%증식%선병독
构建表达成骨相关转录因子Osx的腺病毒,观察Osx对原代培养的小鼠成骨细胞增殖与分化的调控作用.将Osx编码基因克隆入腺病毒载体pAdEasy中,经293A包装后得到重组腺病毒,感染原代培养的小鼠颅骨细胞,茜素红染色观察矿化程度,实时定量RT-PCR检测成骨相关标志基因的转录水平,流式细胞检测细胞周期的改变.结果发现,(1)得到的病毒滴度为2×109PFU/ml,最佳感染复数为50;(2)表达Osx并不能够促进成骨细胞的矿化;(3)定量RT-PCR表明表达Osx 1d,3d,6d后成骨分化标志骨钙素、骨涎蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达量明显上调(p<0.01);(4)流式细胞仪的结果表明Osx能够促进成骨细胞的增殖(p<0.01).通过腺病毒在原代培养的成骨细胞中表达Osx能够促进成骨细胞的增殖,并对其分化具有一定的调控作用,为Osx在各种骨损伤的基因治疗应用方面提供了基础.
構建錶達成骨相關轉錄因子Osx的腺病毒,觀察Osx對原代培養的小鼠成骨細胞增殖與分化的調控作用.將Osx編碼基因剋隆入腺病毒載體pAdEasy中,經293A包裝後得到重組腺病毒,感染原代培養的小鼠顱骨細胞,茜素紅染色觀察礦化程度,實時定量RT-PCR檢測成骨相關標誌基因的轉錄水平,流式細胞檢測細胞週期的改變.結果髮現,(1)得到的病毒滴度為2×109PFU/ml,最佳感染複數為50;(2)錶達Osx併不能夠促進成骨細胞的礦化;(3)定量RT-PCR錶明錶達Osx 1d,3d,6d後成骨分化標誌骨鈣素、骨涎蛋白、Ⅰ型膠原蛋白的錶達量明顯上調(p<0.01);(4)流式細胞儀的結果錶明Osx能夠促進成骨細胞的增殖(p<0.01).通過腺病毒在原代培養的成骨細胞中錶達Osx能夠促進成骨細胞的增殖,併對其分化具有一定的調控作用,為Osx在各種骨損傷的基因治療應用方麵提供瞭基礎.
구건표체성골상관전록인자Osx적선병독,관찰Osx대원대배양적소서성골세포증식여분화적조공작용.장Osx편마기인극륭입선병독재체pAdEasy중,경293A포장후득도중조선병독,감염원대배양적소서로골세포,천소홍염색관찰광화정도,실시정량RT-PCR검측성골상관표지기인적전록수평,류식세포검측세포주기적개변.결과발현,(1)득도적병독적도위2×109PFU/ml,최가감염복수위50;(2)표체Osx병불능구촉진성골세포적광화;(3)정량RT-PCR표명표체Osx 1d,3d,6d후성골분화표지골개소、골연단백、Ⅰ형효원단백적표체량명현상조(p<0.01);(4)류식세포의적결과표명Osx능구촉진성골세포적증식(p<0.01).통과선병독재원대배양적성골세포중표체Osx능구촉진성골세포적증식,병대기분화구유일정적조공작용,위Osx재각충골손상적기인치료응용방면제공료기출.
