临床心血管病杂志
臨床心血管病雜誌
림상심혈관병잡지
JOURNAL OF CLINICAL CARDIOLOGY
2008年
2期
140-144
,共5页
陈飞兰%张华蓉%徐承平%卞修武
陳飛蘭%張華蓉%徐承平%卞脩武
진비란%장화용%서승평%변수무
内皮祖细胞%CD34%CD133%KDR%CD14
內皮祖細胞%CD34%CD133%KDR%CD14
내피조세포%CD34%CD133%KDR%CD14
目的:探索人脐静脉血内皮祖细胞的分离和扩增条件,并观测其生物学特性.方法:采集人脐静脉血,应用密度梯度离心法,分离其中单个核细胞,流式细胞术检测CD133+CD34+阳性率;利用差速贴壁法(48 h内贴壁和48 h后贴壁)联合内皮细胞专用培养基EGM-2培养细胞,接种于预先包埋了明胶培养瓶或培养板,倒置显微镜观察细胞生长形态和形成集落能力,免疫细胞化学法检测其免疫表型,摄取Ac-LDL和连接UEA-1功能,在生长因子培养体系中诱导其向成熟内皮细胞分化.结果:所获单个核细胞中CD133+CD34+百分比为1.06%;在EGM-2培养体系下可获得2种亚型的内皮祖细胞,即早期内皮祖细胞和晚期增殖性内皮祖细胞.其中48h后贴壁细胞属于早期内皮祖细胞,增殖能力较弱,免疫荧光检测,显示CD14和CD34KDR胞浆呈阳性表达,Ac-LDL+UEA-1+功能特征;而48 h内贴壁细胞在10～17 d时可见由单个细胞增殖形成的克隆,呈铺路石样单层排列,增殖力旺盛形成融合状态,形成次集集落;经免疫荧光检测,显示CD133CD34和CD34KDR细胞质呈阳性表达,Ae-LDL+UEA-1+功能特征,传代后vWF,CD31呈强阳性表达,是晚期增殖性内皮祖细胞.结论:经人脐静脉血可分离培养获得2种亚型的内皮祖细胞,在特定的培养体系中细胞可由祖细胞表型向成熟内皮细胞分化.
目的:探索人臍靜脈血內皮祖細胞的分離和擴增條件,併觀測其生物學特性.方法:採集人臍靜脈血,應用密度梯度離心法,分離其中單箇覈細胞,流式細胞術檢測CD133+CD34+暘性率;利用差速貼壁法(48 h內貼壁和48 h後貼壁)聯閤內皮細胞專用培養基EGM-2培養細胞,接種于預先包埋瞭明膠培養瓶或培養闆,倒置顯微鏡觀察細胞生長形態和形成集落能力,免疫細胞化學法檢測其免疫錶型,攝取Ac-LDL和連接UEA-1功能,在生長因子培養體繫中誘導其嚮成熟內皮細胞分化.結果:所穫單箇覈細胞中CD133+CD34+百分比為1.06%;在EGM-2培養體繫下可穫得2種亞型的內皮祖細胞,即早期內皮祖細胞和晚期增殖性內皮祖細胞.其中48h後貼壁細胞屬于早期內皮祖細胞,增殖能力較弱,免疫熒光檢測,顯示CD14和CD34KDR胞漿呈暘性錶達,Ac-LDL+UEA-1+功能特徵;而48 h內貼壁細胞在10～17 d時可見由單箇細胞增殖形成的剋隆,呈鋪路石樣單層排列,增殖力旺盛形成融閤狀態,形成次集集落;經免疫熒光檢測,顯示CD133CD34和CD34KDR細胞質呈暘性錶達,Ae-LDL+UEA-1+功能特徵,傳代後vWF,CD31呈彊暘性錶達,是晚期增殖性內皮祖細胞.結論:經人臍靜脈血可分離培養穫得2種亞型的內皮祖細胞,在特定的培養體繫中細胞可由祖細胞錶型嚮成熟內皮細胞分化.
목적:탐색인제정맥혈내피조세포적분리화확증조건,병관측기생물학특성.방법:채집인제정맥혈,응용밀도제도리심법,분리기중단개핵세포,류식세포술검측CD133+CD34+양성솔;이용차속첩벽법(48 h내첩벽화48 h후첩벽)연합내피세포전용배양기EGM-2배양세포,접충우예선포매료명효배양병혹배양판,도치현미경관찰세포생장형태화형성집락능력,면역세포화학법검측기면역표형,섭취Ac-LDL화련접UEA-1공능,재생장인자배양체계중유도기향성숙내피세포분화.결과:소획단개핵세포중CD133+CD34+백분비위1.06%;재EGM-2배양체계하가획득2충아형적내피조세포,즉조기내피조세포화만기증식성내피조세포.기중48h후첩벽세포속우조기내피조세포,증식능력교약,면역형광검측,현시CD14화CD34KDR포장정양성표체,Ac-LDL+UEA-1+공능특정;이48 h내첩벽세포재10～17 d시가견유단개세포증식형성적극륭,정포로석양단층배렬,증식력왕성형성융합상태,형성차집집락;경면역형광검측,현시CD133CD34화CD34KDR세포질정양성표체,Ae-LDL+UEA-1+공능특정,전대후vWF,CD31정강양성표체,시만기증식성내피조세포.결론:경인제정맥혈가분리배양획득2충아형적내피조세포,재특정적배양체계중세포가유조세포표형향성숙내피세포분화.
