中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
12期
17-21
,共5页
毕研伟%罗娜%龙海亭%杨增福%杨旭%李健锋%徐维明
畢研偉%囉娜%龍海亭%楊增福%楊旭%李健鋒%徐維明
필연위%라나%룡해정%양증복%양욱%리건봉%서유명
重组肿瘤坏死因子-α突变体%表达纯化%单甲氧基聚乙二醇丁醛%生物活性%系统毒性
重組腫瘤壞死因子-α突變體%錶達純化%單甲氧基聚乙二醇丁醛%生物活性%繫統毒性
중조종류배사인자-α돌변체%표체순화%단갑양기취을이순정철%생물활성%계통독성
应用搭桥PCR技术,将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除,对hTNF-α的第8/9/10/29/31/157位氨基酸的密码子进行定点突变,将突变后的cDNA插入到pBV220载体中构建重组质粒pBV220-tnf-αD4.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,筛选获得了高效表达TNF-αD4突变体的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45%左右,经硫酸铵沉淀和阳离子交换层析纯化得到纯度达90%以上的重组目的蛋白,比活性达到8×107.用单甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)对TNF-αD4进行修饰,经阳离子交换层析纯化得到mPEG-TNF-αD4,纯度达85%以上,比活性达到8.6 ×107,系统毒性也有了明显的降低.通过应用PEG修饰肿瘤坏死因子-α,为降低其毒性,增加其活性进行了有益的尝试,为其进一步研究与开发奠定了基础.
應用搭橋PCR技術,將腫瘤壞死因子-α基因的前4位氨基痠的編碼序列刪除,對hTNF-α的第8/9/10/29/31/157位氨基痠的密碼子進行定點突變,將突變後的cDNA插入到pBV220載體中構建重組質粒pBV220-tnf-αD4.將重組質粒轉化大腸桿菌DH5α,篩選穫得瞭高效錶達TNF-αD4突變體的工程菌,錶達的重組蛋白約佔菌體蛋白總量的45%左右,經硫痠銨沉澱和暘離子交換層析純化得到純度達90%以上的重組目的蛋白,比活性達到8×107.用單甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)對TNF-αD4進行脩飾,經暘離子交換層析純化得到mPEG-TNF-αD4,純度達85%以上,比活性達到8.6 ×107,繫統毒性也有瞭明顯的降低.通過應用PEG脩飾腫瘤壞死因子-α,為降低其毒性,增加其活性進行瞭有益的嘗試,為其進一步研究與開髮奠定瞭基礎.
응용탑교PCR기술,장종류배사인자-α기인적전4위안기산적편마서렬산제,대hTNF-α적제8/9/10/29/31/157위안기산적밀마자진행정점돌변,장돌변후적cDNA삽입도pBV220재체중구건중조질립pBV220-tnf-αD4.장중조질립전화대장간균DH5α,사선획득료고효표체TNF-αD4돌변체적공정균,표체적중조단백약점균체단백총량적45%좌우,경류산안침정화양리자교환층석순화득도순도체90%이상적중조목적단백,비활성체도8×107.용단갑양기취을이순-정철(mPEG-ButyrALD)대TNF-αD4진행수식,경양리자교환층석순화득도mPEG-TNF-αD4,순도체85%이상,비활성체도8.6 ×107,계통독성야유료명현적강저.통과응용PEG수식종류배사인자-α,위강저기독성,증가기활성진행료유익적상시,위기진일보연구여개발전정료기출.
