CAJ | 학술논문

目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列.方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coli HB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性.MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响.结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P＜0.001).同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖.结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础.
목적:종인원단련가변구편단(ScFv)문고중사선여결체조직생장인자(CTGF)특이결합적서균체극륭,획득ScFv안기산서렬.방법:이중조류양화환원단백-결체조직생장인자(TrxA-CTGF)융합단백위파목표,용차이흡부법,축보증가선택압력,경과4륜친화사선후수궤도취8개극륭,제취DNA후측서;측서양성적DNA전화E.coli HB2151,IPTG유도후용간접ELISA방법검측배양상청단련항체적활성.MTT법측정단련항체대CTGF촉인근곡신소관상피HK-2세포증식작용적영향.결과:종8개극륭중획득7개완전일치적DNA서렬(W0616);령유1개극륭주실료중련,차경련광가구(FR)화호보결정구(CDR)서렬여W0616불일치;양성극륭경유도후,배양상청용간접ELISA시험증실능여CTGF발생특이성결합,여TrxA급음성대조비교차이현저(P＜0.001).동시,해단련항체편단능명현억제CTGF인기적HK-2세포적증식.결론:성공획득여CTGF특이결합적인원단련항체가변구서렬,위CTGF억제제적연구전정기출.