温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2007年
5期
433-435,439
,共4页
胡永仙%俞康%谭映霞%沈志坚%梁彬%钱红兰%单大名
鬍永仙%俞康%譚映霞%瀋誌堅%樑彬%錢紅蘭%單大名
호영선%유강%담영하%침지견%량빈%전홍란%단대명
单链抗体%逆转录病毒%PA 317细胞%基因表达%NIH 3T3细胞
單鏈抗體%逆轉錄病毒%PA 317細胞%基因錶達%NIH 3T3細胞
단련항체%역전록병독%PA 317세포%기인표체%NIH 3T3세포
目的:构建pLNCX/anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,转染PA 317细胞株,包装制备重组非复制型逆转录病毒.方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/CD80的真核逆转录病毒载体pLNCX质粒上,转染PA 317细胞株,经G418筛选,收获上清液获非复制型逆转录病毒,将病毒感染NIH 3T3细胞株,用PCR、流式细胞术检测目的基因在NIH 3T3细胞中的表达情况,确定病毒滴度.结果:经酶切及测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/CD80/CD28/ζ的成功构建;采用PCR方法能够从逆转录病毒感染的NIH 3T3细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段;流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白.结论:成功构建高滴度表达anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ非复制型逆转录病毒,并能在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白.
目的:構建pLNCX/anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ的重組真覈錶達載體,轉染PA 317細胞株,包裝製備重組非複製型逆轉錄病毒.方法:採用DNA重組技術把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/CD80的真覈逆轉錄病毒載體pLNCX質粒上,轉染PA 317細胞株,經G418篩選,收穫上清液穫非複製型逆轉錄病毒,將病毒感染NIH 3T3細胞株,用PCR、流式細胞術檢測目的基因在NIH 3T3細胞中的錶達情況,確定病毒滴度.結果:經酶切及測序鑒定均證實pLNCX/anti-CD20scFv/CD80/CD28/ζ的成功構建;採用PCR方法能夠從逆轉錄病毒感染的NIH 3T3細胞中擴增齣一條與目的基因大小一緻的DNA片段;流式細胞術檢測顯示該目的基因能夠在NIH 3T3細胞中錶達目的蛋白.結論:成功構建高滴度錶達anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ非複製型逆轉錄病毒,併能在NIH 3T3細胞中錶達目的蛋白.
목적:구건pLNCX/anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ적중조진핵표체재체,전염PA 317세포주,포장제비중조비복제형역전록병독.방법:채용DNA중조기술파pBULLET상적CD28-ζcDNA삽입도이함anti-CD20 scFv/CD80적진핵역전록병독재체pLNCX질립상,전염PA 317세포주,경G418사선,수획상청액획비복제형역전록병독,장병독감염NIH 3T3세포주,용PCR、류식세포술검측목적기인재NIH 3T3세포중적표체정황,학정병독적도.결과:경매절급측서감정균증실pLNCX/anti-CD20scFv/CD80/CD28/ζ적성공구건;채용PCR방법능구종역전록병독감염적NIH 3T3세포중확증출일조여목적기인대소일치적DNA편단;류식세포술검측현시해목적기인능구재NIH 3T3세포중표체목적단백.결론:성공구건고적도표체anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ비복제형역전록병독,병능재NIH 3T3세포중표체목적단백.
