CAJ | 학술논문

目的:以TNF-α/act D诱导的细胞凋亡作为一种内皮细胞损伤的模型,通过转染细胞色素P450表氧化酶基因BM3·F87V、2C110R以及2J2产生内源性EDHF(EETs),探讨EDHF是否具有抗内皮细胞损伤的作用及其机制.方法:以CYP450表氧化酶BM3·F87V、2C11OR及2J2基因转染3-4代培养的牛主动脉血管内皮细胞.通过MTT方法检测细胞活性.基因转染24 h后,用TNF-α/act D作用一定时间诱导内皮细胞凋亡,以细胞形态学观察,DNA ladder分析,流式细胞仪分析(Annexin-V-FITC和propidium iodide双染法)作为检测细胞凋亡的指标.结果:MTT分析显示,转染CYP450 BM3·F87V、2C11OR以及CYP2J2基因的内皮细胞活性(分别为189.0%±18.0%,166.0%±22.6%或131.0%±22.8%)强于对照组(100.0%±21.3%).经TNF-α/act D诱导,转染pCB6的对照组内皮细胞大量脱落,未脱落细胞中许多细胞核呈碎裂颗粒状(约20.1%±0.9%);而转染CYPBM3·F87V、CYP2C110R或CYP2J2基因的内皮细胞仅见少数核呈碎颗粒状(分别约1.2%±0.2%,1.0%±0.2%或3.1%±0.2%).DNA ladder分析显示TNF-α/act D诱导后,转染表氧化酶基因的内皮细胞所形成的梯形条带弱于对照组.进一步用流式细胞仪定量检测表明,转染细胞色素表氧化酶基因CYP BM3 F87V或2C11OR内皮细胞中凋亡细胞所占比例(分别为12.35%±4.55%,10.92%±3.57%)明显低于对照组(29.57%±2.84%),而转染CYP2J2的细胞凋亡率也明显低于对照组.结论:转染CYP450基因能够增加内皮细胞活性,抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,具有内皮细胞保护效应.
목적:이TNF-α/act D유도적세포조망작위일충내피세포손상적모형,통과전염세포색소P450표양화매기인BM3·F87V、2C110R이급2J2산생내원성EDHF(EETs),탐토EDHF시부구유항내피세포손상적작용급기궤제.방법:이CYP450표양화매BM3·F87V、2C11OR급2J2기인전염3-4대배양적우주동맥혈관내피세포.통과MTT방법검측세포활성.기인전염24 h후,용TNF-α/act D작용일정시간유도내피세포조망,이세포형태학관찰,DNA ladder분석,류식세포의분석(Annexin-V-FITC화propidium iodide쌍염법)작위검측세포조망적지표.결과:MTT분석현시,전염CYP450 BM3·F87V、2C11OR이급CYP2J2기인적내피세포활성(분별위189.0%±18.0%,166.0%±22.6%혹131.0%±22.8%)강우대조조(100.0%±21.3%).경TNF-α/act D유도,전염pCB6적대조조내피세포대량탈락,미탈락세포중허다세포핵정쇄렬과립상(약20.1%±0.9%);이전염CYPBM3·F87V、CYP2C110R혹CYP2J2기인적내피세포부견소수핵정쇄과립상(분별약1.2%±0.2%,1.0%±0.2%혹3.1%±0.2%).DNA ladder분석현시TNF-α/act D유도후,전염표양화매기인적내피세포소형성적제형조대약우대조조.진일보용류식세포의정량검측표명,전염세포색소표양화매기인CYP BM3 F87V혹2C11OR내피세포중조망세포소점비례(분별위12.35%±4.55%,10.92%±3.57%)명현저우대조조(29.57%±2.84%),이전염CYP2J2적세포조망솔야명현저우대조조.결론:전염CYP450기인능구증가내피세포활성,억제TNF-α유도적내피세포조망,구유내피세포보호효응.