中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
9期
8-13
,共6页
徐莉%赵舟宙%刘辉%李文鑫
徐莉%趙舟宙%劉輝%李文鑫
서리%조주주%류휘%리문흠
人补体调节蛋白%双基因重组表达载体%共表达%超急性排斥反应
人補體調節蛋白%雙基因重組錶達載體%共錶達%超急性排斥反應
인보체조절단백%쌍기인중조표체재체%공표체%초급성배척반응
利用双启动子构建含人补体调节蛋白MCP和CD59 cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-MCPCD59-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP转化细胞.PCR实验结果显示人MCP和CD59整合在转化的NIH3T3细胞的染色体上,RT-PCR和Western blot实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人MCP和CD59在转化细胞中的共表达. 检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系. 补体溶破实验表明, pcDNA3-MCPCD59-DP转染细胞由于人MCP和CD59的共表达获得了较MCP或CD59单一表达时更好的保护功效,能有效地保护NIH3T3细胞免受人补体的攻击,从而抑制补体依赖的细胞毒反应的发生. 以上结果表明所构建的双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值.
利用雙啟動子構建含人補體調節蛋白MCP和CD59 cDNA的雙順反子重組錶達載體pcDNA3-MCPCD59-DP,以燐痠鈣沉澱法轉染NIH3T3細胞,用G418篩選穫得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP轉化細胞.PCR實驗結果顯示人MCP和CD59整閤在轉化的NIH3T3細胞的染色體上,RT-PCR和Western blot實驗分彆從RNA水平和蛋白質水平證實瞭人MCP和CD59在轉化細胞中的共錶達. 檢測連續傳代30次的NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP結果錶明人MCP和CD59基因仍穩定整閤在細胞基因組中,併未隨著傳代而丟失,為穩定的轉雙基因細胞繫. 補體溶破實驗錶明, pcDNA3-MCPCD59-DP轉染細胞由于人MCP和CD59的共錶達穫得瞭較MCP或CD59單一錶達時更好的保護功效,能有效地保護NIH3T3細胞免受人補體的攻擊,從而抑製補體依賴的細胞毒反應的髮生. 以上結果錶明所構建的雙基因重組錶達載體實現瞭人補體調節蛋白基因高效轉移和高水平共錶達,在剋服超急性排斥反應的基因治療中有潛在的應用價值.
이용쌍계동자구건함인보체조절단백MCP화CD59 cDNA적쌍순반자중조표체재체pcDNA3-MCPCD59-DP,이린산개침정법전염NIH3T3세포,용G418사선획득NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP전화세포.PCR실험결과현시인MCP화CD59정합재전화적NIH3T3세포적염색체상,RT-PCR화Western blot실험분별종RNA수평화단백질수평증실료인MCP화CD59재전화세포중적공표체. 검측련속전대30차적NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP결과표명인MCP화CD59기인잉은정정합재세포기인조중,병미수착전대이주실,위은정적전쌍기인세포계. 보체용파실험표명, pcDNA3-MCPCD59-DP전염세포유우인MCP화CD59적공표체획득료교MCP혹CD59단일표체시경호적보호공효,능유효지보호NIH3T3세포면수인보체적공격,종이억제보체의뢰적세포독반응적발생. 이상결과표명소구건적쌍기인중조표체재체실현료인보체조절단백기인고효전이화고수평공표체,재극복초급성배척반응적기인치료중유잠재적응용개치.
