动物学研究
動物學研究
동물학연구
ZOOLOGICAL RESEARCH
2007年
5期
470-476
,共7页
Igf-2r%表观遗传%克隆牛%DNA甲基化%基因印迹
Igf-2r%錶觀遺傳%剋隆牛%DNA甲基化%基因印跡
Igf-2r%표관유전%극륭우%DNA갑기화%기인인적
目前认为克隆效率低的主要原因是供体核的不完全重编程导致发育过程中一些重要的基因异常表达.运用DNA甲基化转移酶抑制剂5'-脱氧胞苷(5'-azacytidine,5'-aza)处理MDBK细胞(牛肾上皮细胞),并通过实时荧光定量PCR方法对Igf-2r基因的表达进行了定量分析;在此基础上,应用亚硫酸盐甲基化测序法检测正常牛及克隆牛脑、肺、心、肝组织Igf-2r印迹调控区DMR 2(DNA differentially methylated region,DMR)及非印迹调控区3'-UTR(3'-untranslated region,UTR)的DNA甲基化水平.研究发现,5'-aza处理MDBK细胞后,Igf-2r基因的表达上调.正常牛各组织中Igf-2r DMR 2区的DNA甲基化程度差异较大,3'-UTR区较稳定;与正常牛相比,克隆牛DMR 2区的甲基化程度变化较大,3'-UTR区无显著性变化.结果表明,DNA甲基化修饰影响Igf-2r基因的表达.正常牛不同组织中Igf-2r基因DMR 2区的DNA甲基化程度不同,提示Igf-2r基因的印迹调控方式在不同组织中可能不同.克隆牛发育过程中,调控Igf-2r基因印迹的DMR 2表观结构被明显改变,而非印迹调控区3'-UTR则无明显变化,提示Igf-2r基因印迹调控区被破坏,很可能是导致克隆牛发育异常的一个重要原因.
目前認為剋隆效率低的主要原因是供體覈的不完全重編程導緻髮育過程中一些重要的基因異常錶達.運用DNA甲基化轉移酶抑製劑5'-脫氧胞苷(5'-azacytidine,5'-aza)處理MDBK細胞(牛腎上皮細胞),併通過實時熒光定量PCR方法對Igf-2r基因的錶達進行瞭定量分析;在此基礎上,應用亞硫痠鹽甲基化測序法檢測正常牛及剋隆牛腦、肺、心、肝組織Igf-2r印跡調控區DMR 2(DNA differentially methylated region,DMR)及非印跡調控區3'-UTR(3'-untranslated region,UTR)的DNA甲基化水平.研究髮現,5'-aza處理MDBK細胞後,Igf-2r基因的錶達上調.正常牛各組織中Igf-2r DMR 2區的DNA甲基化程度差異較大,3'-UTR區較穩定;與正常牛相比,剋隆牛DMR 2區的甲基化程度變化較大,3'-UTR區無顯著性變化.結果錶明,DNA甲基化脩飾影響Igf-2r基因的錶達.正常牛不同組織中Igf-2r基因DMR 2區的DNA甲基化程度不同,提示Igf-2r基因的印跡調控方式在不同組織中可能不同.剋隆牛髮育過程中,調控Igf-2r基因印跡的DMR 2錶觀結構被明顯改變,而非印跡調控區3'-UTR則無明顯變化,提示Igf-2r基因印跡調控區被破壞,很可能是導緻剋隆牛髮育異常的一箇重要原因.
목전인위극륭효솔저적주요원인시공체핵적불완전중편정도치발육과정중일사중요적기인이상표체.운용DNA갑기화전이매억제제5'-탈양포감(5'-azacytidine,5'-aza)처리MDBK세포(우신상피세포),병통과실시형광정량PCR방법대Igf-2r기인적표체진행료정량분석;재차기출상,응용아류산염갑기화측서법검측정상우급극륭우뇌、폐、심、간조직Igf-2r인적조공구DMR 2(DNA differentially methylated region,DMR)급비인적조공구3'-UTR(3'-untranslated region,UTR)적DNA갑기화수평.연구발현,5'-aza처리MDBK세포후,Igf-2r기인적표체상조.정상우각조직중Igf-2r DMR 2구적DNA갑기화정도차이교대,3'-UTR구교은정;여정상우상비,극륭우DMR 2구적갑기화정도변화교대,3'-UTR구무현저성변화.결과표명,DNA갑기화수식영향Igf-2r기인적표체.정상우불동조직중Igf-2r기인DMR 2구적DNA갑기화정도불동,제시Igf-2r기인적인적조공방식재불동조직중가능불동.극륭우발육과정중,조공Igf-2r기인인적적DMR 2표관결구피명현개변,이비인적조공구3'-UTR칙무명현변화,제시Igf-2r기인인적조공구피파배,흔가능시도치극륭우발육이상적일개중요원인.
