中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
9期
642-645
,共4页
张淑子%张娲%张海红%吴永革%于湘晖%孔维
張淑子%張媧%張海紅%吳永革%于湘暉%孔維
장숙자%장왜%장해홍%오영혁%우상휘%공유
黏蛋白%串联重复区%真核表达%肿瘤抗原%肿瘤疫苗
黏蛋白%串聯重複區%真覈錶達%腫瘤抗原%腫瘤疫苗
점단백%천련중복구%진핵표체%종류항원%종류역묘
目的 构建人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)17重复序列肿瘤抗原真核表达载体,并在COS-7、HeLa和Lewis细胞中表达.方法 设计1对分别含SalⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,PCR法合成1重复MUC1 VNTR片段,克隆入pGEM-T easy载体,依据SalⅠ和XhoⅠ酶切产生相同黏性末端的特性,依次连接,构建17重复MUC1 VNTR(17m),再亚克隆至VR1012真核表达载体,构建真核表达质粒VR1012-17m.分别转染COS-7、HeLa和Lewis细胞,并进行检测.结果 酶切鉴定和序列分析证实,构建的重组质粒含17m序列,经转染的COS-7、HeLa和Lewis细胞,RT-PCR检测均有17m mRNA转录,Western blot检测均有17m蛋白的表达,并与MUC1 VNTR单抗产生特异性反应.结论 已成功构建17m肿瘤抗原真核表达载体,并在COS-7、HeLa和Lewis细胞中得到表达,可用于MUC1疫苗和肿瘤生物学治疗的进一步研究.
目的 構建人黏蛋白1串聯重複區(MUC1 VNTR)17重複序列腫瘤抗原真覈錶達載體,併在COS-7、HeLa和Lewis細胞中錶達.方法 設計1對分彆含SalⅠ和XhoⅠ酶切位點的引物,PCR法閤成1重複MUC1 VNTR片段,剋隆入pGEM-T easy載體,依據SalⅠ和XhoⅠ酶切產生相同黏性末耑的特性,依次連接,構建17重複MUC1 VNTR(17m),再亞剋隆至VR1012真覈錶達載體,構建真覈錶達質粒VR1012-17m.分彆轉染COS-7、HeLa和Lewis細胞,併進行檢測.結果 酶切鑒定和序列分析證實,構建的重組質粒含17m序列,經轉染的COS-7、HeLa和Lewis細胞,RT-PCR檢測均有17m mRNA轉錄,Western blot檢測均有17m蛋白的錶達,併與MUC1 VNTR單抗產生特異性反應.結論 已成功構建17m腫瘤抗原真覈錶達載體,併在COS-7、HeLa和Lewis細胞中得到錶達,可用于MUC1疫苗和腫瘤生物學治療的進一步研究.
목적 구건인점단백1천련중복구(MUC1 VNTR)17중복서렬종류항원진핵표체재체,병재COS-7、HeLa화Lewis세포중표체.방법 설계1대분별함SalⅠ화XhoⅠ매절위점적인물,PCR법합성1중복MUC1 VNTR편단,극륭입pGEM-T easy재체,의거SalⅠ화XhoⅠ매절산생상동점성말단적특성,의차련접,구건17중복MUC1 VNTR(17m),재아극륭지VR1012진핵표체재체,구건진핵표체질립VR1012-17m.분별전염COS-7、HeLa화Lewis세포,병진행검측.결과 매절감정화서렬분석증실,구건적중조질립함17m서렬,경전염적COS-7、HeLa화Lewis세포,RT-PCR검측균유17m mRNA전록,Western blot검측균유17m단백적표체,병여MUC1 VNTR단항산생특이성반응.결론 이성공구건17m종류항원진핵표체재체,병재COS-7、HeLa화Lewis세포중득도표체,가용우MUC1역묘화종류생물학치료적진일보연구.
