中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
20期
3882-3885
,共4页
缺氧%神经干细胞%鼠脑微血管内皮细胞%增殖%凋亡
缺氧%神經榦細胞%鼠腦微血管內皮細胞%增殖%凋亡
결양%신경간세포%서뇌미혈관내피세포%증식%조망
目的:观察脑微血管内皮细胞对体外培养缺氧神经干细胞增殖、凋亡的影响.方法:实验于1996-01/1996-12在佳木斯大学神经科学所完成.实验材料:同一基因背景新生的Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物学部提供(黑动字第99102001).实验方法:①取新生24 h Wistar大鼠大脑培养神经干细胞,采用免疫组织化学方法鉴定神经干细胞.②取出生1～7 d Wistar大鼠大脑培养脑微血管内皮细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定.③将培养传代纯化的脑微血管内皮细胞,用0.25%胰酶消化成单细胞液后接种于涂有多聚赖氨酸包被的盖玻片上,接种传3代后用胰酶消化的神经干细胞,以1:10接种比例加入神经细胞完全培养液共培养.④用无菌石蜡油覆盖于低糖细胞培养液表面,制备低氧低糖溶液.对照组:正常神经干细胞置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养.缺氧共培养组:取共培养3 d细胞,吸出培养液,用无菌Hank's缓冲液清洗2次,加入低氧低糖溶液共同作用2,4,8,16 h后换液,用PBS缓冲液冲洗3次后,换神经细胞完全培养液,置于细胞培养箱中复氧培养.缺氧单纯神经干细胞组:取传3代神经干细胞,用无菌Hank's缓冲液清洗2次后,方法同上.实验评估:免疫组织荧光鉴定缺氧条件下神经干细胞的增殖与凋亡.结果:①免疫组织化学方法检测Nestin及Ⅷ因子相关抗原分别鉴定为神经干细胞及脑微血管内皮细胞.②对照组细胞胞体饱满,折光性强,周围有光晕.缺氧单纯神经干细胞组细胞胞体肿胀,折光性差,有大量细胞碎屑,仅有少量活细胞,并出现悬浮死细胞.缺氧共培养组细胞形态有所改善,细胞折光性仍较好,大部分细胞突起仍未见回缩,仅少数细胞肿胀,坏死.③随着缺氧时间的延长,细胞死亡明显增多,存活数明显下降.缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组与对照组(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P＜0.01).④缺氧条件下脑微血管内皮细胞对神经干细胞增殖及凋亡的影响:缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组,细胞凋亡细胞数低于缺氧单纯神经干细胞组(P＜0.05).结论:脑微血管内皮细胞可以促进缺氧神经干细胞的增殖、减少其凋亡.
目的:觀察腦微血管內皮細胞對體外培養缺氧神經榦細胞增殖、凋亡的影響.方法:實驗于1996-01/1996-12在佳木斯大學神經科學所完成.實驗材料:同一基因揹景新生的Wistar大鼠由哈爾濱醫科大學實驗動物學部提供(黑動字第99102001).實驗方法:①取新生24 h Wistar大鼠大腦培養神經榦細胞,採用免疫組織化學方法鑒定神經榦細胞.②取齣生1～7 d Wistar大鼠大腦培養腦微血管內皮細胞,採用免疫細胞化學方法鑒定.③將培養傳代純化的腦微血管內皮細胞,用0.25%胰酶消化成單細胞液後接種于塗有多聚賴氨痠包被的蓋玻片上,接種傳3代後用胰酶消化的神經榦細胞,以1:10接種比例加入神經細胞完全培養液共培養.④用無菌石蠟油覆蓋于低糖細胞培養液錶麵,製備低氧低糖溶液.對照組:正常神經榦細胞置于37℃、體積分數為0.05的CO2飽和濕度培養.缺氧共培養組:取共培養3 d細胞,吸齣培養液,用無菌Hank's緩遲液清洗2次,加入低氧低糖溶液共同作用2,4,8,16 h後換液,用PBS緩遲液遲洗3次後,換神經細胞完全培養液,置于細胞培養箱中複氧培養.缺氧單純神經榦細胞組:取傳3代神經榦細胞,用無菌Hank's緩遲液清洗2次後,方法同上.實驗評估:免疫組織熒光鑒定缺氧條件下神經榦細胞的增殖與凋亡.結果:①免疫組織化學方法檢測Nestin及Ⅷ因子相關抗原分彆鑒定為神經榦細胞及腦微血管內皮細胞.②對照組細胞胞體飽滿,摺光性彊,週圍有光暈.缺氧單純神經榦細胞組細胞胞體腫脹,摺光性差,有大量細胞碎屑,僅有少量活細胞,併齣現懸浮死細胞.缺氧共培養組細胞形態有所改善,細胞摺光性仍較好,大部分細胞突起仍未見迴縮,僅少數細胞腫脹,壞死.③隨著缺氧時間的延長,細胞死亡明顯增多,存活數明顯下降.缺氧共培養組細胞存活數明顯高于缺氧單純神經榦細胞組與對照組(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P＜0.01).④缺氧條件下腦微血管內皮細胞對神經榦細胞增殖及凋亡的影響:缺氧共培養組細胞存活數明顯高于缺氧單純神經榦細胞組,細胞凋亡細胞數低于缺氧單純神經榦細胞組(P＜0.05).結論:腦微血管內皮細胞可以促進缺氧神經榦細胞的增殖、減少其凋亡.
목적:관찰뇌미혈관내피세포대체외배양결양신경간세포증식、조망적영향.방법:실험우1996-01/1996-12재가목사대학신경과학소완성.실험재료:동일기인배경신생적Wistar대서유합이빈의과대학실험동물학부제공(흑동자제99102001).실험방법:①취신생24 h Wistar대서대뇌배양신경간세포,채용면역조직화학방법감정신경간세포.②취출생1～7 d Wistar대서대뇌배양뇌미혈관내피세포,채용면역세포화학방법감정.③장배양전대순화적뇌미혈관내피세포,용0.25%이매소화성단세포액후접충우도유다취뢰안산포피적개파편상,접충전3대후용이매소화적신경간세포,이1:10접충비례가입신경세포완전배양액공배양.④용무균석사유복개우저당세포배양액표면,제비저양저당용액.대조조:정상신경간세포치우37℃、체적분수위0.05적CO2포화습도배양.결양공배양조:취공배양3 d세포,흡출배양액,용무균Hank's완충액청세2차,가입저양저당용액공동작용2,4,8,16 h후환액,용PBS완충액충세3차후,환신경세포완전배양액,치우세포배양상중복양배양.결양단순신경간세포조:취전3대신경간세포,용무균Hank's완충액청세2차후,방법동상.실험평고:면역조직형광감정결양조건하신경간세포적증식여조망.결과:①면역조직화학방법검측Nestin급Ⅷ인자상관항원분별감정위신경간세포급뇌미혈관내피세포.②대조조세포포체포만,절광성강,주위유광훈.결양단순신경간세포조세포포체종창,절광성차,유대량세포쇄설,부유소량활세포,병출현현부사세포.결양공배양조세포형태유소개선,세포절광성잉교호,대부분세포돌기잉미견회축,부소수세포종창,배사.③수착결양시간적연장,세포사망명현증다,존활수명현하강.결양공배양조세포존활수명현고우결양단순신경간세포조여대조조(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P＜0.01).④결양조건하뇌미혈관내피세포대신경간세포증식급조망적영향:결양공배양조세포존활수명현고우결양단순신경간세포조,세포조망세포수저우결양단순신경간세포조(P＜0.05).결론:뇌미혈관내피세포가이촉진결양신경간세포적증식、감소기조망.
