中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
6期
460-464
,共5页
基质金属蛋白酶-9(MMP-9)%骨骼肌细胞%基因表达
基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)%骨骼肌細胞%基因錶達
기질금속단백매-9(MMP-9)%골격기세포%기인표체
为探讨利用培养的骨骼肌细胞表达人基质金属蛋白酶的可行性,利用PCR和DNA重组技术构建人mmp-9-myc-his/pcDNA3基因表达载体,转染成肌细胞QM-7,G418筛选阳性转染子.诱导细胞分化成肌管后,收集细胞培养上清.经Western印迹检测,表达产物分子量为93 kD,与蛋白标准品对照推测表达量约10～15 mg/L.利用Ni-NTA琼脂糖从1 L培养上清中纯化到4～6 mg MMP-9纯品,纯化效率约50%.经明胶酶谱检测,表达蛋白可以降解明胶.这些结果表明:所表达的MMP-9具有生物活性,为以MMP-9为靶分子的特异拮抗剂和/或药物的筛选、MMP-9定量检测试剂盒的开发以及MMP-9的功能研究奠定了基础;以鹌鹑成肌细胞QM-7作为外源蛋白脊椎动物细胞表达体系具有表达量高、经济等优点,有可能进一步研究开发成为新的外源重组蛋白脊椎动物细胞表达体系.
為探討利用培養的骨骼肌細胞錶達人基質金屬蛋白酶的可行性,利用PCR和DNA重組技術構建人mmp-9-myc-his/pcDNA3基因錶達載體,轉染成肌細胞QM-7,G418篩選暘性轉染子.誘導細胞分化成肌管後,收集細胞培養上清.經Western印跡檢測,錶達產物分子量為93 kD,與蛋白標準品對照推測錶達量約10～15 mg/L.利用Ni-NTA瓊脂糖從1 L培養上清中純化到4～6 mg MMP-9純品,純化效率約50%.經明膠酶譜檢測,錶達蛋白可以降解明膠.這些結果錶明:所錶達的MMP-9具有生物活性,為以MMP-9為靶分子的特異拮抗劑和/或藥物的篩選、MMP-9定量檢測試劑盒的開髮以及MMP-9的功能研究奠定瞭基礎;以鵪鶉成肌細胞QM-7作為外源蛋白脊椎動物細胞錶達體繫具有錶達量高、經濟等優點,有可能進一步研究開髮成為新的外源重組蛋白脊椎動物細胞錶達體繫.
위탐토이용배양적골격기세포표체인기질금속단백매적가행성,이용PCR화DNA중조기술구건인mmp-9-myc-his/pcDNA3기인표체재체,전염성기세포QM-7,G418사선양성전염자.유도세포분화성기관후,수집세포배양상청.경Western인적검측,표체산물분자량위93 kD,여단백표준품대조추측표체량약10～15 mg/L.이용Ni-NTA경지당종1 L배양상청중순화도4～6 mg MMP-9순품,순화효솔약50%.경명효매보검측,표체단백가이강해명효.저사결과표명:소표체적MMP-9구유생물활성,위이MMP-9위파분자적특이길항제화/혹약물적사선、MMP-9정량검측시제합적개발이급MMP-9적공능연구전정료기출;이암순성기세포QM-7작위외원단백척추동물세포표체체계구유표체량고、경제등우점,유가능진일보연구개발성위신적외원중조단백척추동물세포표체체계.
