中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
5期
36-40
,共5页
刁世勇%张新伟%饶青%邢海燕%陈森%王建祥%王敏
刁世勇%張新偉%饒青%邢海燕%陳森%王建祥%王敏
조세용%장신위%요청%형해연%진삼%왕건상%왕민
iASPP p53 基因克隆 原核表达 纯化
iASPP p53 基因剋隆 原覈錶達 純化
iASPP p53 기인극륭 원핵표체 순화
iASPP是新近发现的高度保守的p53相关基因,其蛋白产物定位于细胞核内,具有结合NF-κB p65亚基和p53功能,进而抑制NF-κB的转录调节和p53对凋亡的调节功能.利用RT-PCR方法从人白血病细胞系U-937中克隆出癌基因iASPP,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,成功构建iASPP表达载体PIAF,重组质粒读码框和序列与预期一致.在IPTG诱导下,重组载体大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,表达产物经SDS-PAGE和Western blot方法分析证实系iASPP融合蛋白.利用Ni离子鳌合层析的方法纯化iASPP融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定其纯度超过80%.
iASPP是新近髮現的高度保守的p53相關基因,其蛋白產物定位于細胞覈內,具有結閤NF-κB p65亞基和p53功能,進而抑製NF-κB的轉錄調節和p53對凋亡的調節功能.利用RT-PCR方法從人白血病細胞繫U-937中剋隆齣癌基因iASPP,將其剋隆至原覈錶達載體pET28a(+)中,成功構建iASPP錶達載體PIAF,重組質粒讀碼框和序列與預期一緻.在IPTG誘導下,重組載體大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株,錶達產物經SDS-PAGE和Western blot方法分析證實繫iASPP融閤蛋白.利用Ni離子鼇閤層析的方法純化iASPP融閤蛋白,經SDS-PAGE鑒定其純度超過80%.
iASPP시신근발현적고도보수적p53상관기인,기단백산물정위우세포핵내,구유결합NF-κB p65아기화p53공능,진이억제NF-κB적전록조절화p53대조망적조절공능.이용RT-PCR방법종인백혈병세포계U-937중극륭출암기인iASPP,장기극륭지원핵표체재체pET28a(+)중,성공구건iASPP표체재체PIAF,중조질립독마광화서렬여예기일치.재IPTG유도하,중조재체대장간균Rosetta(DE3)균주,표체산물경SDS-PAGE화Western blot방법분석증실계iASPP융합단백.이용Ni리자오합층석적방법순화iASPP융합단백,경SDS-PAGE감정기순도초과80%.
