西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2004年
1期
18-23
,共6页
嗜麦芽假单胞菌AT18%启动子%高活性片段%亚克隆技术
嗜麥芽假單胞菌AT18%啟動子%高活性片段%亞剋隆技術
기맥아가단포균AT18%계동자%고활성편단%아극륭기술
将从嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA获得一段约1.4kb的DNA片段克隆进启动子探针载体pKK232-8,转化大肠杆菌HB101获得重组质粒PAS1(具有很强启动活性),可抗Cm达1 000 μg/mL.实验采用亚克隆技术,经过提取质粒、酶切、电泳、回收、连接等步骤将该有启动活性的插入片段缩小,欲获得一段有强的启动功能的最小活性片段.首先通过单酶切图谱发现该插入片段上有3个单酶切位点即kpnI、BglⅡ和PstI;再将双酶切所得各DNA片段设计为不同的方案,或直接连接,或末端补平连接,或亚克隆处理,以启动子探针质粒pKK232-8为载体,转化大肠杆菌HB101,利用氯霉素平板筛选重组质粒.结果表明,该插入片段的活性功能存在于Kpn1和HindⅢ双酶切所得的一段约300 bp的DNA片段,将该小片段进行亚克隆所得重组质粒PAS1-3仍有很强的Cm抗性.
將從嗜麥芽單胞菌AT18的染色體DNA穫得一段約1.4kb的DNA片段剋隆進啟動子探針載體pKK232-8,轉化大腸桿菌HB101穫得重組質粒PAS1(具有很彊啟動活性),可抗Cm達1 000 μg/mL.實驗採用亞剋隆技術,經過提取質粒、酶切、電泳、迴收、連接等步驟將該有啟動活性的插入片段縮小,欲穫得一段有彊的啟動功能的最小活性片段.首先通過單酶切圖譜髮現該插入片段上有3箇單酶切位點即kpnI、BglⅡ和PstI;再將雙酶切所得各DNA片段設計為不同的方案,或直接連接,或末耑補平連接,或亞剋隆處理,以啟動子探針質粒pKK232-8為載體,轉化大腸桿菌HB101,利用氯黴素平闆篩選重組質粒.結果錶明,該插入片段的活性功能存在于Kpn1和HindⅢ雙酶切所得的一段約300 bp的DNA片段,將該小片段進行亞剋隆所得重組質粒PAS1-3仍有很彊的Cm抗性.
장종기맥아단포균AT18적염색체DNA획득일단약1.4kb적DNA편단극륭진계동자탐침재체pKK232-8,전화대장간균HB101획득중조질립PAS1(구유흔강계동활성),가항Cm체1 000 μg/mL.실험채용아극륭기술,경과제취질립、매절、전영、회수、련접등보취장해유계동활성적삽입편단축소,욕획득일단유강적계동공능적최소활성편단.수선통과단매절도보발현해삽입편단상유3개단매절위점즉kpnI、BglⅡ화PstI;재장쌍매절소득각DNA편단설계위불동적방안,혹직접련접,혹말단보평련접,혹아극륭처리,이계동자탐침질립pKK232-8위재체,전화대장간균HB101,이용록매소평판사선중조질립.결과표명,해삽입편단적활성공능존재우Kpn1화HindⅢ쌍매절소득적일단약300 bp적DNA편단,장해소편단진행아극륭소득중조질립PAS1-3잉유흔강적Cm항성.
